具有犬自然杀伤细胞体外激活功能的组合物及体外培养的方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115125204A(43)申请公布日2022.09.30(21)申请号202210846301.0(22)申请日2022.07.19(71)申请人百欧派（天津）生物技术有限公司地址300350天津市津南区咸水沽镇聚兴道7号2号楼七层、八层申请人西北农林科技大学(72)发明人赵献军魏强马樱琬田方杰白春娜张翊华(74)专利代理机构北京润平知识产权代理有限公司11283专利代理师赵泽丽(51)Int.Cl.C12N5/0783(2010.01)权利要求书1页说明书9页附图4页(54)发明名称具有犬自然杀伤细胞体外激活功能的组合物及体外培养的方法(57)摘要本发明涉及细胞体外培养领域，公开了一种具有犬自然杀伤细胞体外激活功能的组合物及体外培养的方法。该组合物含有糖皮质激素、人白介素2、人白介素15、CD335单克隆抗体和CD16单克隆抗体，避免了使用饲养层细胞共培养激活和扩增犬自然杀伤细胞带来的临床风险，降低了犬自然杀伤的制备成本和技术要求。通过该组合物培养得到的犬自然杀伤细胞能够高效扩增，而且得到的自然杀伤细胞纯度高，避免其他非自然杀伤细胞的存在引起的细胞毒性和细胞因子风暴等副作用，降低临床应用风险。CN115125204ACN115125204A权利要求书1/1页1.一种具有犬自然杀伤细胞体外激活功能的组合物，其特征在于，该组合物含有糖皮质激素、人白介素2、人白介素15、CD335单克隆抗体和CD16单克隆抗体。2.根据权利要求1所述的组合物，其中，相对于每纳克的CD335单克隆抗体，所述糖皮质激素的含量为0.06‑0.3μg、人白介素2的含量为2‑8IU、人白介素15的含量为0.2‑0.8ng、CD16单克隆抗体的含量为1‑4ng；优选地，相对于每纳克的CD335单克隆抗体，所述糖皮质激素的含量为0.07‑0.15μg、人白介素2的含量为2‑4IU、人白介素15的含量为0.2‑0.6ng、CD16单克隆抗体的含量为1‑2ng。3.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述糖皮质激素为泼尼松、甲泼尼松、倍他米松、丙酸倍氯米松、泼尼松龙、氢化可的松和地塞米松中的至少一种，优选为氢化可的松。4.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物中还包括RPMI‑1640培养基、胎牛血清和灭活的A群链球菌(Streptococcuspyogenes)中的至少一种。5.根据权利要求4所述的组合物，其中，所述RPMI‑1640培养基和胎牛血清的体积比为4‑20：1；和/或，相对于总量为1mL的RPMI‑1640培养基和胎牛血清，所述CD335单克隆抗体的含量为50‑200ng。6.根据权利要求4所述的组合物，其中，相对于每纳克的CD335单克隆抗体，所述灭活的A群链球菌的含量为0‑0.0008KE，优选为0.0002‑0.0004KE；和/或，所述灭活的A群链球菌优选为沙培林。7.一种犬自然杀伤细胞的体外培养方法，其特征在于，该方法包括：将犬外周血单个核细胞与权利要求1‑6中任意一项所述的组合物混合进行激活培养。8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述组合物的用量使得犬外周血单个核细胞在混合体系中的初始细胞密度≥3×106个细胞/mL；和/或，所述激活培养的条件包括：饱和湿度，温度为36‑38℃，CO2含量为5‑10％。9.根据权利要求7所述的方法，其中，所述体外培养的方法还包括将激活培养后的细胞进行分离和扩增；所述扩增的条件包括：饱和湿度，温度为36‑38℃，CO2含量为5‑10％；所述扩增使用的培养液含有人白介素2、人白介素15、RPMI‑1640培养基和胎牛血清。10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述扩增使用的培养液中RPMI‑1640培养基和胎牛血清的体积比为4‑20：1；和/或，相对于总量为1mL的RPMI‑1640培养基和胎牛血清，人白介素2的含量为1000‑4000IU，优选为1000‑2000IU；人白介素15的含量为10‑50ng，优选为20‑30ng。2CN115125204A说明书1/9页具有犬自然杀伤细胞体外激活功能的组合物及体外培养的方法技术领域[0001]本发明涉及细胞体外培养领域，具体涉及一种具有犬自然杀伤细胞体外激活功能的组合物及体外培养的方法。背景技术[0002]自然杀伤细胞(naturalkillercell，NK)是机体重要的免疫细胞。NK细胞可以选择性杀伤肿瘤细胞，病毒感染细胞，衰老细胞等靶细胞，在肿瘤免疫治疗，病毒疾病免疫治疗，抗衰老治疗中发挥重要作用。在临床应用中，NK细胞主要是通过培养外周血单个核细胞(Peripheralbloodmononuclearcell，PBMC)获得，体外培养可以扩增并纯化NK细胞，使其达到临床应用的数量和纯