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(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115094037A(43)申请公布日2022.09.23(21)申请号202210846883.2(22)申请日2022.07.19(71)申请人百欧派(天津)生物技术有限公司地址300350天津市津南区咸水沽镇聚兴道7号2号楼七层、八层申请人西北农林科技大学(72)发明人赵献军魏强白春娜田方杰马樱琬张翊华(74)专利代理机构北京润平知识产权代理有限公司11283专利代理师赵泽丽(51)Int.Cl.C12N5/0783(2010.01)权利要求书1页说明书8页附图3页(54)发明名称配合自体血浆使用的具有犬自然杀伤细胞体外激活功能的组合物及其用途(57)摘要本发明涉及细胞培养领域,公开了一种配合自体血浆使用的具有犬自然杀伤细胞体外激活功能的组合物及其用途。该组合物含有糖皮质激素、人白介素2、人白介素15、CD335单克隆抗体、CD16单克隆抗体以及相对于每纳克的CD335单克隆抗体含量为10‑40IU的人白介素2和含量为0.6‑2.4ng的人白介素15,能够不依赖使用胎牛血清作为培养基提供营养物质,使得制备的犬自然杀伤细胞安全且能高效扩增,并避免了异源性蛋白、外源性病毒和其他致病因子导致的致病和污染、不可量产以及易过敏的缺陷,更好的应用于宠物临床细胞治疗,减小宠物临床治疗的风险。CN115094037ACN115094037A权利要求书1/1页1.一种配合自体血浆使用的具有犬自然杀伤细胞体外激活功能的组合物,其特征在于,该组合物含有糖皮质激素、人白介素2、人白介素15、CD335单克隆抗体和CD16单克隆抗体,其中,相对于每纳克的CD335单克隆抗体,人白介素2的含量为10‑40IU,人白介素15的含量为0.6‑2.4ng。2.根据权利要求1所述的组合物,其中,相对于每纳克的CD335单克隆抗体,所述糖皮质激素的含量为0.06‑0.3μg,CD16单克隆抗体的含量为1‑4ng;优选地,相对于每纳克的CD335单克隆抗体,所述糖皮质激素的含量为0.07‑0.15μg、人白介素2的含量为10‑20IU、人白介素15的含量为0.6‑1.2ng和CD16单克隆抗体的含量为1‑2ng。3.根据权利要求2所述的组合物,其中,所述糖皮质激素为泼尼松、甲泼尼松、倍他米松、丙酸倍氯米松、泼尼松龙、氢化可的松和地塞米松中的至少一种,优选为氢化可的松。4.根据权利要求1所述的组合物,其中,所述组合物中还包括X‑VIVO15培养基、犬自体血浆和灭活的A群链球菌(Streptococcuspyogenes)中的至少一种。5.根据权利要求4所述组合物,其中,所述X‑VIVO15培养基和犬自体血浆的体积比为9‑50:1;和/或,相对于总量为1mL的X‑VIVO15培养基和犬自体血浆,所述CD335单克隆抗体的含量为50‑200ng。6.据权利要求4所述的组合物,其中,相对于每纳克的CD335单克隆抗体,所述灭活的A群链球菌的含量为0‑0.0016KE,优选为0.0004‑0.0008KE;和/或,所述灭活的A群链球菌优选为沙培林。7.一种利用自体血浆体外培养犬自然杀伤细胞的方法,其特征在于,该方法包括:将犬自体血浆分离得到外周血单个核细胞与权利要求1‑6中任意一项所述的组合物混合进行激活培养。8.根据权利要求7所述的方法,其中,所述组合物的用量使得犬外周血单个核细胞在混合体系中的初始细胞密度≥3×106个细胞/mL;和/或,所述激活培养的条件包括:饱和湿度,温度为36‑38℃,CO2含量为5‑10%。9.根据权利要求7所述的方法,其中,所述体外培养的方法还包括将激活培养后的细胞进行分离和扩增;所述扩增的条件包括:饱和湿度,温度为36‑38℃,CO2含量为5‑10%;所述扩增使用的培养液含有人白介素2、人白介素15、X‑VIVO15培养基和犬自体血浆。10.根据权利要求9所述的方法,其中,所述扩增使用的培养液中X‑VIVO15培养基和犬自体血浆的体积比为9‑50:1;和/或,相对于总量为1mL的X‑VIVO15培养基和犬自体血浆,人白介素2的含量为1000‑4000IU,优选为1000‑2000IU;人白介素15的含量为30‑120ng,优选为30‑60ng。2CN115094037A说明书1/8页配合自体血浆使用的具有犬自然杀伤细胞体外激活功能的组合物及其用途技术领域[0001]本发明涉及细胞体外培养领域,具体涉及一种配合自体血浆使用的具有犬自然杀伤细胞体外激活功能的组合物及其用途。背景技术[0002]自然杀伤细胞(naturalkillercell,NK)作为机体重要的免疫细胞。在肿瘤免疫治疗,病毒疾病免疫治疗,抗衰老治疗中发挥重要作用。在临床应用中,通过培养外周血单个核细胞(Perip