一种高纯度中生菌素D对照品及其制备方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115232182A(43)申请公布日2022.10.25(21)申请号202210462635.8(22)申请日2022.04.29(71)申请人陕西麦可罗生物科技有限公司地址715500陕西省渭南市蒲城县高新技术产业开发区(72)发明人张楠(74)专利代理机构北京五月天专利商标代理有限公司11294专利代理师张瑞丰(51)Int.Cl.C07H17/02(2006.01)C07H1/06(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图3页(54)发明名称一种高纯度中生菌素D对照品及其制备方法(57)摘要本发明涉及一种高纯度中生菌素D对照品及其制备方法，中生菌素母药依次经过活性炭脱色、凝胶分离、脱盐凝胶脱盐、低压浓缩、高压色谱制备分离、浓缩冻干的步骤得到纯度≥96%的中生菌素D对照品。本发明可应用于目前企业生产中生菌素质量分数的检测，填补了目前中生菌素物对照品的空白，极大的降低了中生菌素的质量控制成本，有效的解决了中生菌素质量层次不齐的现象，有利于增强生物农药企业的可持续发展。CN115232182ACN115232182A权利要求书1/1页1.一种高纯度的中生菌素D对照品的制备方法，其特征在于，中生菌素母药依次经过活性炭脱色、凝胶分离、脱盐凝胶脱盐、低压浓缩、高压色谱制备分离、浓缩冻干的步骤得到纯度≥96%的中生菌素D对照品。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，包括以下工艺步骤：1）活性炭脱色：中生菌素母药溶解，溶解浓度为8~12%，加入活性炭，搅拌，温度控制在35~40℃，静置，用滤纸进行过滤，除去活性炭；2）凝胶分离：将步骤1）的过滤溶液上分离凝胶进行分离，流动相为甲醇，流速为0.5~1BV/h，分段收集流出液，对流出液进行检测，收集含有中生菌素D馏分；3）减压浓缩，甲醇除盐：将步骤2）的滤液进行浓缩，浓缩完成后，加入甲醇，洗出中生菌素，然后继续浓缩，重复上述步骤约2~3次，最后将甲醇蒸干，将剩余固形物用纯水进行溶解；4）脱盐凝胶脱盐：将步骤3）的溶液分次上脱盐凝胶，待样品完全进入凝胶后，加纯水作为流动相，流速0.5~1BV/h，分段收集流出液，对流出液进行检测，收集含有中生菌素D馏分；5）减压浓缩：将含有中生菌素D的馏分进行混合，浓缩减少体积；6）高压制备：将步骤5）的浓缩液用高压制备色谱仪进行高压制备，收集含中生菌素D馏分，制备后中生菌素D的纯度≥96%；7）减压浓缩、冻干：将步骤6）制备出的中生菌素D纯度≥96%馏分混合菌素进行浓缩，将浓缩液冻干，得到纯度≥96%的白色固体中生菌素D对照品。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，活性炭浓度为0.2%~0.5%。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，分离凝胶为SephadexG，1L凝胶上样量为8~10ml，流动相为3%~5%甲醇。5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（6）中，制备过程中，流速30~70ml/min，检测波长200nm，上样体积1~3ml；色谱柱50mm*250mm，内装C18、10μm填料，流动相3~5%甲醇。6.根据权利要求1‑5中任一项所述的制备方法制备得到的中生菌素D对照品，其特征在于，其纯度≥96%。2CN115232182A说明书1/4页一种高纯度中生菌素D对照品及其制备方法技术领域[0001]本发明属于农用抗生素提纯技术领域，具体涉及一种高纯度中生菌素D对照品及其制备方法。背景技术[0002]中生菌素，化学名称为链丝菌素（streptothricins），是最早发现的抗生素之一，链丝菌素早在1942年即由Waksman的研究小组所发现，但其化学结构一直到1982年才通过人工全合成而最终确定。中生菌素的化学结构由链里定内酰胺、古洛糖胺和赖氨酸侧链三部分组成，具有杀菌活性的主要成分有7个，根据赖氨酸的数量从1‑7分别命名为链丝菌素F、E、D、C、B、A和X。[0003]中生菌素抗菌谱广，能抗革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌、分枝杆菌、酵母菌及丝状真菌，对人畜中等毒性。我国目前有效登记的中生菌素原药及制剂共有42个品种，其中12%中生菌素母药登记产品1个，3%中生菌素可湿性粉剂13个，5%中生菌素可湿性粉剂1个，混配可湿性粉剂22个，其余为颗粒剂及水剂等，可以看出可湿性粉剂制剂占有绝大部分的比例，主要用于防治苹果轮纹病、黄瓜细菌性角斑病、番茄青枯病等病害。目前福建凯立母药年产值折百约120t，按照市场价100‑120万/吨的价格估算，价值约1.4亿元左右，生产为制剂价值约4.5亿/年，在生物农药的市场占有率很可观。根据我们前期对中生菌素的检测发现，中生菌素产品中，中生菌素D占总有效成分的25%左右，在使用中贡献了很大