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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108864257A(43)申请公布日2018.11.23(21)申请号201810684846.X(22)申请日2018.06.28(71)申请人杭州中美华东制药有限公司地址310011浙江省杭州市拱墅区莫干山路866号(72)发明人傅立峰诸敏吴萍高庆峰(51)Int.Cl.C07K7/64(2006.01)C07K1/36(2006.01)C07K1/30(2006.01)C07K1/16(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图1页(54)发明名称高纯度环孢菌素A及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种新的高纯度环孢菌素A及其制备方法。将环孢菌素A发酵液过滤,菌渣用乙醇浸提,浓缩,浓缩物加碱液处理,可除去大量杂质,同时有利于萃取分层。萃取液经脱色,结晶,得到纯度90%以上的粗品。粗品经柱层析、结晶纯化可得到纯度99.5%的环孢菌素A精品。本发明提供的方法操作简单,收率高,溶媒耗量少,生产周期短,成本低,适合于工业化生产,制得的环孢菌素A纯度高,提高了药品的质量和安全性。CN108864257ACN108864257A权利要求书1/1页1.一种环孢菌素A粗品的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:(1)、将环孢菌素A发酵液过滤,菌渣用乙醇解析,浓缩除去乙醇,得浓缩物;(2)、浓缩物加碱液处理得处理液;(3)、处理液用有机溶剂萃取,脱色,浓缩后结晶得环孢菌素A粗品。2.如权利要求1所述的环孢菌素A粗品的制备方法,其特征在于:所得粗品纯度在90%以上。3.如权利要求1所述的环孢菌素A粗品的制备方法,其特征在于:步骤(2)中所述碱液选自NaOH溶液、KOH溶液或Na2CO3溶液,优选NaOH溶液。4.如权利要求1所述的环孢菌素A粗品的制备方法,其特征在于:步骤(2)中所述碱液浓度为0.5-1.5N,优选1N。5.如权利要求1-4中任一项所述的环孢菌素A粗品的制备方法,其特征在于:步骤(2)中所述加碱液处理为加碱液至体系pH=9.5~11.5,并于50~60℃水浴中搅拌2小时,优选60℃。6.如权利要求1所述的环孢菌素A粗品的制备方法,其特征在于:步骤(3)中所述有机溶剂为乙酸乙酯,乙酸乙酯与处理液的体积比为3-4∶1。7.如权利要求1所述的环孢菌素A粗品的制备方法,其特征在于:步骤(3)中所述脱色为,加入萃取液体积2-4%(W/V)的活性炭,搅拌2小时,过滤、洗涤得脱色液。8.如权利要求1所述的环孢菌素A粗品的制备方法,其特征在于:步骤(3)中所述结晶的方法为,浓缩后的残留物中加入丙酮,残留物与丙酮的重量体积比为0.8-1.5∶1,-5℃至-18℃下放置结晶20小时以上。9.如权利要求1所述的环孢菌素A粗品制备高纯度环孢菌素A的方法,其特征在于:环孢菌素A粗品经柱层析纯化,收集孢菌素A组分大于98.5%层析流份,浓缩,结晶得到纯度≥99.5%的环孢菌素A精品。2CN108864257A说明书1/5页高纯度环孢菌素A及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及药物纯化技术领域,具体涉及一种环孢菌素A粗品的制备方法及其用于高效制备高纯度环孢菌素A的方法。背景技术[0002]环孢菌素A是一种含有11个氨基酸的环状多肽化合物,是一种作用很强的免疫抑制剂,广泛应用于肾脏、肝脏、心脏和肺等实体器官移植后的抗排异治疗。它还可以用于治疗成人的特应性皮炎,及用来治疗一些自身免疫疾病。[0003]目前,环孢菌素A主要通过微生物发酵的方法获得。发酵完成的发酵液中,除了含有环孢菌素A以外,还含有B、C、D、G、H等其他几种环孢菌素以及培养基成分、各种菌体代谢物等其它杂质。现有技术对环孢菌素A提纯的主要工艺路线为先用有机溶剂提取,然后通过不同类型的柱层析或结合结晶进行分离纯化。[0004]US5656459公开了经特定含量范围的非活性成分组成的培养基静态发酵后,发酵液用甲醇萃取得到一次残留物,一次残留物脱色后经乙酸乙酯萃取得到二次残留物,二次残留物经硅胶柱层析纯化,用正己烷/氯仿/甲醇洗脱得到三次残留物,最后再用树脂柱纯化,甲醇洗脱获得环孢菌素A。该方法经两次常规萃取得到环孢菌素A粗品,柱层析前粗品杂质种类和含量较多,需两次柱层析纯化,且使用毒性较大的氯仿和甲醇做洗脱剂,生产成本高、环境不友好,不适用于工业化生产。[0005]WO20010064935公开了将发酵液用甲醇萃取后,浓缩液中加入明矾搅拌3小时,过滤,滤饼用环己烷溶解,浓缩后得到纯度为59.8%的环孢菌素A粗品,粗品再经凝胶过滤、柱层析和结晶纯化得到环孢菌素A产品。[0006]CN200510108097.9公开了向发酵液中直接加丙酮、过滤,减压浓缩,再用乙酸乙酯萃取,有机相浓缩至干后用丙酮/水/正己烷三相萃取两次,