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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109851649A(43)申请公布日2019.06.07(21)申请号201910143165.7(22)申请日2019.02.27(71)申请人内蒙古拜克生物有限公司地址010206内蒙古自治区呼和浩特市托克托县托克托工业园区(72)发明人陈峰王奇刘培侯争平杨爱华(74)专利代理机构北京精金石知识产权代理有限公司11470代理人刘俊玲(51)Int.Cl.C07H17/08(2006.01)C07H1/06(2006.01)权利要求书1页说明书6页(54)发明名称一种制备高纯度多杀菌素的分离纯化方法(57)摘要本发明提供了一种制备高纯度多杀菌素的分离纯化方法,涉及抗生素提取技术领域。该方法操作步骤包括:刺糖多孢菌发酵液预处理、浸提、大孔树脂吸附、纳滤浓缩和结晶。对分离纯化工艺进行了优化,使用了预处理剂、浸提溶剂、洗脱剂和结晶剂,并对其用量进行了优化;对预处理后离心的沉淀进行二次浸提,提高了多杀菌素的纯度和收率,纯度为97.6%-98.8%,收取率为91.3%-95.8%。另外,优化了大孔树脂吸附的操作过程,有效减少了有机溶剂的用量,降低了生产成本,缩短了生产周期,工艺流程更加简单易控制。CN109851649ACN109851649A权利要求书1/1页1.一种制备高纯度多杀菌素的分离纯化方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)刺糖多孢菌发酵液预处理:用NaOH水溶液调节发酵液pH,加入预处理剂,搅拌混匀,静置,离心,分别收集沉淀和上清液A;所述的预处理剂包括甲醇、丙酮、二甲基酰胺、月桂醇硫酸钠和山梨酸钾;(2)浸提:向步骤(1)收集的沉淀中加入浸提溶剂,搅拌混匀,静置,离心,收集上清液B,与步骤(1)收集的上清液A合并,加入等体积浸提溶剂,搅拌混匀,静置,离心,收集上清液C,重复浸提,得到浸提液;所述的浸提溶剂包括甲醇和乙腈;(3)大孔树脂吸附:用NaOH水溶液调节浸提液pH,洗脱流速为30-50mL/h过大孔树脂,洗脱剂为甲醇和丙酮的混合溶液,收集洗脱液,离心,取上清液D;(4)纳滤浓缩:将步骤(3)得到的上清液D进行纳滤,操作温度48℃,操作压力0.5-0.8Mpa,得到浓缩液;(5)结晶:向步骤(4)得到的浓缩液中加入结晶剂,浓缩液与结晶剂的体积比为1:2-5,搅拌,真空烘干,结晶,加入80%乙醇重结晶,真空干燥,得到浅灰白色固体结晶,即为纯化的多杀菌素;所述的结晶剂包括乙醇和丁酮。2.根据权利要求1所述的分离纯化方法,其特征在于,步骤(1)中所述发酵液与预处理剂体积比为1:0.5-2.5。3.根据权利要求2所述的分离纯化方法,其特征在于,所述的预处理剂包括体积比为30%的甲醇、20%的丙酮、5%的二甲基酰胺、月桂醇硫酸钠1.8g/L和1.6-2.2g/L山梨酸钾。4.根据权利要求1所述的分离纯化方法,其特征在于,步骤(2)中所述的浸提溶剂包括体积比为50%的甲醇和20%的乙腈。5.根据权利要求1所述的分离纯化方法,其特征在于,步骤(2)中沉淀与加入的浸提溶剂比例为1:2。6.根据权利要求1所述的分离纯化方法,其特征在于,步骤(3)中所述的洗脱流速为40mL/h。7.根据权利要求1所述的分离纯化方法,其特征在于,步骤(3)中所述的洗脱剂由90%甲醇水溶液和50%丙酮水溶液按照1:1-2的体积比配制而成。8.根据权利要求1所述的分离纯化方法,其特征在于,所述步骤(4)中纳滤所用的纳滤膜为截留相对分子质量为500-700Da的聚酰胺纳滤膜。9.根据权利要求1所述的分离纯化方法,其特征在于,步骤(5)中所述浓缩液与结晶剂的体积比为1:3。10.根据权利要求1所述的分离纯化方法,其特征在于,所述步骤(5)中的结晶剂包括乙醇和丁酮体积比为2:1。2CN109851649A说明书1/6页一种制备高纯度多杀菌素的分离纯化方法技术领域[0001]本发明涉及抗生素提取技术领域,具体涉及一种制备高纯度多杀菌素的分离纯化方法。背景技术[0002]多杀菌素(spinosad)是一种新型的绿色广谱大环内酯类生物杀虫剂,由土壤放线菌刺糖多孢菌(Saccharopolysporaspinosa)经有氧发酵后产生的胞内次级代谢产物。在天然多杀菌素分离提取物中,两个最高活性组分是spinosynA和spinosynD,分别占所有组分的85%-90%和10%-15%。多杀菌素为浅灰白色的固体结晶,带有类似于轻微陈腐泥土气味,易溶于甲醇、乙醇、乙腈、乙酸乙酯、丙酮、乙腈、二甲基酰胺、二氯甲烷等有机溶剂,在水溶液中的pH值为7.74。多杀菌素能够有效控制鳞翅目、双翅目和缨翅目害虫,同时对某些特定种类的害虫也有一定的毒杀作用,具有杀虫谱广、高效、低残留、作用方式独特、环境友好和对非靶