一种海洋杂色曲霉胞外多糖、制备方法及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115260336A(43)申请公布日2022.11.01(21)申请号202210947634.2C12N1/14(2006.01)(22)申请日2022.08.09A61K31/715(2006.01)A61P37/02(2006.01)(83)生物保藏信息C12R1/66(2006.01)GDMCCNo:611062020.07.27(71)申请人华南农业大学地址510642广东省广州市天河区五山华南农业大学(72)发明人张晓勇陈祁静莫丽黄日明陈子慧王毅卓(74)专利代理机构广州文智专利代理事务所(特殊普通合伙)44469专利代理师丁海燕(51)Int.Cl.C08B37/02(2006.01)C12P19/04(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图16页(54)发明名称一种海洋杂色曲霉胞外多糖、制备方法及其应用(57)摘要本发明公开了一种海洋杂色曲霉胞外多糖、制备方法及其应用。从中国南海海域的石珊瑚(Scleractinia)样品中分离得到海洋杂色曲霉(AspergillusversicolorSCAU141)菌株，并对该菌株进行发酵，得到胞外粗多糖AVP141，并对该胞外粗多糖进行分离纯化，得到平均分子量为4082Da的胞外多糖AVP141‑A，并对AVP141‑A进行结构解析，经鉴定为结构新颖的多糖，经体外免疫活性评估，其对RAW264.7巨噬细胞具有免疫调节作用，并推测AVP141‑A是通过影响RAW264.7巨噬细胞的氨基酸代谢，尤其是精氨酸合成和代谢发挥免疫调节作用。CN115260336ACN115260336A权利要求书1/2页1.一种海洋杂色曲霉胞外多糖，其特征在于：所述的海洋杂色曲霉胞外多糖AVP141‑A为具有式1所示的结构的多糖：2.根据权利要求1所述的海洋杂色曲霉胞外多糖，其特征在于：所述海洋杂色曲霉胞外多糖是将海洋杂色曲霉AspergillusversicolorSCAU141接种至发酵液培养基中发酵，得发酵液，对发酵液过滤、浓缩、醇沉、除蛋白、透析、冻干后得粗多糖，粗多糖再经DEAE离子交换柱、G‑100凝胶柱层析分离纯化，得平均分子量为4082Da的胞外多糖AVP141‑A；所述海洋杂色曲霉胞外多糖AVP141‑A的单糖组成为100％葡萄糖；所述海洋杂色曲霉胞外多糖AVP141‑A的糖苷键类型为：[Glcp‑(1→]，[→4)‑Glcp‑(1→]，[→6)‑Glcp‑(1→]，和[→4,6)–Glcp‑(1→]，且摩尔比为16.93:58.80:7.38:16.89。3.根据权利要求2所述的海洋杂色曲霉胞外多糖，其特征在于：所述海洋杂色曲霉胞外多糖AVP141‑A不含有核酸和蛋白质；所述海洋杂色曲霉胞外多糖AVP141‑A不含有糠醛酸；所述海洋杂色曲霉胞外多糖AVP141‑A的硫酸根含量为3.62％。4.一种权利要求1‑3任意一项所述的海洋杂色曲霉胞外多糖的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)制备发酵液培养基：发酵培养基组成为：麦芽糖20g/L、葡萄糖10g/L、甘露糖20g/L、谷氨酸钠10g/L、七水硫酸镁0.3g/L、磷酸二氢钾0.5g/L、玉米浆1g/L、酵母膏3g/L以及海盐30g/L，调整发酵培养基pH值为6.8‑7.5，灭菌，得发酵液培养基；(2)接种培养：将海洋杂色曲霉AspergillusversicolorSCAU141孢子接种至步骤(1)所述的发酵液培养基中培养，得发酵液；(3)除菌体、浓缩：将所述步骤(2)中的发酵液过滤，滤液60℃减压浓缩，得浓缩液；(4)醇沉：向步骤(3)所述的浓缩液中加入无水乙醇，4℃静置，离心收集沉淀，沉淀溶于水，得粗多糖液；(5)除蛋白：向步骤(4)所述的粗多糖液中加入Savage试剂，摇床震荡，离心，保留水相，透析，冻干后得粗多糖AVP141；(6)DEAE离子交换柱分离：用水将步骤(5)所述的粗多糖AVP141配置成10mg/mL溶液，离心，取上清液上样，以0～2mol/L的NaCl溶液洗脱，收集洗脱液，透析，冻干得到粗多糖AVP141‑I；(7)G‑100、G‑25凝胶柱层析纯化：将步骤(6)所述的粗多糖AVP141‑I用超纯水洗脱，透析，冻干得到粗多糖AVP141‑1，使用G‑100葡聚糖凝胶分离AVP141‑1，收集洗脱液，透析，冻干得到均一组分多糖AVP141‑A。5.根据权利要求4所述的海洋杂色曲霉胞外多糖的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中接种培养的温度为26±3℃，培养时间为6‑8天。6.根据权利要求4所述的海洋杂色曲霉胞外多糖的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中浓缩液为原体积1/5‑1/4。2CN115260336A权利要求书2/2页7