一种亮菌胞外多糖的制备方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN116024288A(43)申请公布日2023.04.28(21)申请号202310171661.X(22)申请日2023.02.24(71)申请人华南农业大学地址510642广东省广州市天河区五山(72)发明人王杰杨舒郁张煜琛(74)专利代理机构北京睿智保诚专利代理事务所(普通合伙)11732专利代理师王浩然(51)Int.Cl.C12P19/04(2006.01)C08B37/00(2006.01)C12R1/645(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图3页(54)发明名称一种亮菌胞外多糖的制备方法(57)摘要本发明提供了一种亮菌胞外多糖的制备方法，涉及多糖生产技术领域，所述制备方法包括以下步骤：亮菌发酵液过滤，取滤液，冻融处理，然后，二次过滤，取二次滤液；加热浓缩，得浓缩液；将所述浓缩液与乙醇混合，静置取沉淀；冷冻干燥所述沉淀；克服了因发酵液高粘度导致多糖难以获取的难题，通过液体发酵的方式提高了亮菌胞外多糖的产量，同时以经济绿色的方式获取了高纯度的胞外多糖。CN116024288ACN116024288A权利要求书1/1页1.一种亮菌胞外多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：亮菌发酵液过滤，取滤液，冻融处理，然后，二次过滤，取二次滤液；加热浓缩，得浓缩液；将所述浓缩液与乙醇混合，静置取沉淀；冷冻干燥所述沉淀。2.如权利要求1所述亮菌胞外多糖的制备方法，其特征在于，所述亮菌发酵液的制备方法为液体发酵，亮菌接种量为液体培养基总体积的8～12％，液体发酵的温度为25～31℃，液体发酵的转速为150～210rpm，液体发酵的时间为9～13d。3.如权利要求2所述亮菌胞外多糖的制备方法，其特征在于，所述亮菌发酵液的液体发酵培养基为：去皮马铃薯180～220g/L，葡萄糖15～25g/L，KH2PO41～3g/L，MgSO4·7H2O0.5～1.5g/L，溶剂为水。4.如权利要求1所述亮菌胞外多糖的制备方法，其特征在于，所述过滤和二次过滤为采用四层纱布过滤不溶物。5.如权利要求1所述亮菌胞外多糖的制备方法，其特征在于，所述冻融处理的冻存温度为‑7～‑20℃，冻存时间为36～72h，解冻温度为25～60℃。6.如权利要求1所述亮菌胞外多糖的制备方法，其特征在于，所述加热浓缩的温度为55～65℃。7.如权利要求1所述亮菌胞外多糖的制备方法，其特征在于，所述浓缩液与乙醇混合的体积比为1:3～5，静置时间为12～20h，静置温度为0～4℃。8.如权利要求1所述亮菌胞外多糖的制备方法，其特征在于，所述冷冻干燥的温度为‑40～‑10℃，时间为2～4d。9.如权利要求1所述亮菌胞外多糖的制备方法，其特征在于，得到二次滤液后，还包括微滤，采用大孔树脂吸附处理，所述微滤采用0.8μm的微滤膜；所述大孔树脂吸附处理采用A‑772大孔树脂。10.如权利要求1所述亮菌胞外多糖的制备方法，其特征在于，冷冻干燥沉淀前，还包括加水溶解成浓度为8～12mg/mL溶液，透析；冷冻干燥后，还包括采用阴离子交换柱和葡聚糖凝胶柱处理，二次透析，二次冷冻干燥，得亮菌胞外多糖；所述二次冷冻干燥的温度为‑40～‑10℃，时间为2～4d，所述透析和二次透析采用透析袋进行，所述阴离子交换柱为DEAE‑52，所述葡聚糖凝胶柱为SephadexG‑200。2CN116024288A说明书1/6页一种亮菌胞外多糖的制备方法技术领域[0001]本发明涉及多糖生产技术领域，尤其涉及一种亮菌胞外多糖的制备方法。背景技术[0002]亮菌(Armillariellatabescens)也叫青杠菌、假蜜环菌，属于口蘑科，假蜜环菌属，营养丰富，是一种价值很高的食用兼药用大型真菌，含有多种氨基酸、多糖、多肽和亮菌甲素等生物活性成分。根据相关文献，亮菌对于肝炎、胆囊炎、肿瘤以及放化疗引起的白细胞减少等炎症有一定的疗效，且具有利肺、醒酒、益肠胃、强筋壮骨和疏风活络等保健功效。亮菌中的大分子物质为其提供了良好的生物活性，其中亮菌多糖被报道具有提高免疫、抗氧化、抗衰老、预防心脑血管疾病等多种功效。随着食用菌多糖研究的深入，亮菌多糖作为一类低毒高活性、来源广的生物大分子物质，也日益受到人们的注意和重视。[0003]亮菌多糖包括胞外和胞内多糖，目前报道的亮菌多糖多来源于菌丝体或发酵后的整个产物，几乎未见对亮菌胞外多糖的研究。因此，如何获取亮菌胞外多糖成为了开发利用亮菌胞外多糖的一个基础工作。在实际发酵过程中，胞外多糖的产量会因培养基成分及发酵条件而受影响，最终的发酵状态也会影响后续多糖的纯化。经实验前期的初步探索，发现亮菌在经液体发酵之后呈现出高粘度的状态，极大地影响了后续多糖的获得，这也可能是现有亮菌胞外多糖研究较少的原因之一。因此，如何