用于检测非洲猪瘟病毒和猪圆环病毒2型的试剂盒.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115261510A(43)申请公布日2022.11.01(21)申请号202210529413.3(22)申请日2022.05.16(71)申请人广东省农业科学院动物卫生研究所地址510630广东省广州市天河区五山路白石岗(72)发明人周秀蓉翟颀罗胜军孙铭飞贾春玲吕殿红温肖会(74)专利代理机构北京哌智科创知识产权代理事务所(普通合伙)11745专利代理师刘小兵(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/6851(2018.01)C12N15/11(2006.01)C12R1/93(2006.01)权利要求书2页说明书5页附图2页(54)发明名称用于检测非洲猪瘟病毒和猪圆环病毒2型的试剂盒(57)摘要本发明公开了用于检测非洲猪瘟病毒和猪圆环病毒2型的试剂盒，属于检测试剂盒技术领域，用荧光PCR建立能够区分ASFV和PCV2的精确鉴别检测方法就非常有应用价值，可为ASFV的防控和净化提供新的技术保障，通过参考GenBank中非洲猪瘟病毒的P72基因(MH713612.1)和猪圆环病毒2型的ORF1基因(AF027217)的高度保守序列设计得到针对非洲猪瘟病毒P72基因的引物对(ASFV‑F/R)及探针(ASFV‑P)和针对猪圆环病毒2型ORF1基因的引物对(PCV2‑F/R)及探针(PCV2‑P)。CN115261510ACN115261510A权利要求书1/2页1.用于检测非洲猪瘟病毒和猪圆环病毒2型的试剂盒，其特征在于：包括引物探针混合物和ProTaqHSPremix；其中引物探针混合物包括工作浓度为200nM的ASFV‑F与ASFV‑R；工作浓度为150nM的ASFV‑Probe；工作浓度为200nM的CSFV‑F与CSFV‑R，工作浓度为150nM的CSFV‑Probe。2.根据权利要求1所述的用于检测非洲猪瘟病毒和猪圆环病毒2型的试剂盒，其特征在于：所述ASFV‑F为上游引物且基因序列为CTGCATAATGGCGTTAAC；其中ASFV‑F的识别标记为SEQIDNO.1；ASFV‑R为下游引物且基因序列为GCTGATACGTGTCCATAA；其中ASFV‑R的识别标记为SEQIDNO.2。3.根据权利要求2所述的用于检测非洲猪瘟病毒和猪圆环病毒2型的试剂盒，其特征在于：PCV2‑F为上游引物且基因序列为CTCTCTATCGGAGGATTAC；其中PCV2‑F的识别标记为SEQIDNO.4；PCV2‑R为下游引物且基因序列为CCACTTAAACCCTAAATGAA；其中PCV2‑R的识别标记为SEQIDNO.6。4.根据权利要求3所述的用于检测非洲猪瘟病毒和猪圆环病毒2型的试剂盒，其特征在于：ASFV‑F/R扩增得到的目的基因的序列CTGCATAATGGCGTTAACAACATGTCCGAACTTGTGCCAATCTCGGTGTTGATGAGGATTTTGATCGGAGATGTTCCAGGTAGGTTTTAATCCTATAAACATATATTCAATGGGCCATTTAAGAGCAGACATTAGTTTTTCATCGTGGTGGTTATTGTTGGTGTGGGTCACCTGCGTTTTATGGACACGTATCAGC；其中ASFV‑F/R的识别标记为SEQIDNO.7。5.根据权利要求4所述的用于检测非洲猪瘟病毒和猪圆环病毒2型的试剂盒，其特征在于：PCV2‑F/R扩增得到的目的基因的序列CTCTCTATCGGAGGATTACTTCCTTGGTATTTTGGAAGAATGCTACAGAACAATCCACGGAGGAAGGGGGCCAGTTCGTCACCCTTTCCCCCCCATGCCCTGAATTTCCATATGAAATAAATTACTGAGTCTTTTTTATCACTTCGTAATGGTTTTTATTTTTCATTTAGGGTTTAAGTGG；其中PCV2‑F/R的识别标记为SEQIDNO.8。6.根据权利要求5所述的用于检测非洲猪瘟病毒和猪圆环病毒2型的试剂盒，其特征在于：ASFV‑probe的基因序列为CACCAACAATAACCACCACGATGAA；其中ASFV‑probe的识别标记为SEQIDNO.3。7.根据权利要求6所述的用于检测非洲猪瘟病毒和猪圆环病毒2型的试剂盒，其特征在于：PCV2‑probe的基因序列为AAGAATGCTACAGAACAATCCACGG；其中PCV2‑probe的识别标记为SEQIDNO.6。8.根据权利要求7所述的用于检测非洲猪瘟病毒和猪圆环病毒2型的试剂盒，其特征在于：其中ASFV‑probe的5'端连接有6‑FAM，3'端连接有BHQ1；PCV2‑probe的5'端连接有VIC，3'端连