非洲猪瘟病毒和猪圆环病毒2型双重数字PCR检测引物组合物及其检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114214459A(43)申请公布日2022.03.22(21)申请号202111580813.9(22)申请日2021.12.22(71)申请人山东省动物疫病预防与控制中心地址250010山东省济南市历城区唐冶西路4566号(72)发明人薛瑞雪王苗利李云岗兰邹然李玉杰孙圣福(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司11245代理人关畅(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/686(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书2页说明书8页序列表3页附图2页(54)发明名称非洲猪瘟病毒和猪圆环病毒2型双重数字PCR检测引物组合物及其检测方法(57)摘要本发明公开了非洲猪瘟病毒和猪圆环病毒2型双重数字PCR检测引物探针组合物及其检测方法。所述双重数字PCR检测引物探针组合物包括非洲猪瘟病毒引物探针和猪圆环病毒2型引物探针。本发明还提供检测或辅助检测非洲猪瘟病毒和/或猪圆环病毒2型的方法，所述方法包括使用所述的双重数字PCR引物探针组合物对待测样品进行数字PCR检测，根据数字PCR检测结果判断或辅助判断是否为目的病原菌。本发明提供的试剂或方法操作简便，灵敏性和重复性好，可以精准把控疫病控制效果。CN114214459ACN114214459A权利要求书1/2页1.检测或辅助检测非洲猪瘟病毒和猪圆环病毒2型的双重数字PCR试剂或试剂盒，所述双重数字PCR试剂或试剂盒包括非洲猪瘟病毒引物探针和猪圆环病毒2型引物探针，所述非洲猪瘟病毒引物探针由特异扩增含有核苷酸序列是SEQIDNo.1第75‑173位的片段在内的非洲猪瘟病毒基因组DNA片段的引物和与核苷酸序列是SEQIDNo.1第75‑173位的片段特异结合的探针组成，所述猪圆环病毒2型引物探针由特异扩增含有核苷酸序列是SEQIDNo.2第70‑186位的片段在内的猪圆环病毒2型基因组DNA片段的引物和与核苷酸序列是SEQIDNo.2第70‑186的片段特异结合的探针组成。2.如权利要求1所述的双重数字PCR试剂或试剂盒，其特征在于：所述非洲猪瘟病毒引物探针包括引物ASFV‑F和ASFV‑R、探针ASFV‑Probe，所述猪圆环病毒2型引物探针包括引物PCV2‑F和PCV2‑R、探针PCV2‑Probe，所述ASFV‑F为核苷酸序列是序列表中SEQIDNo.3的单链DNA或其衍生物；所述ASFV‑Probe的核苷酸序列是序列表中SEQIDNo.4；所述ASFV‑R为核苷酸序列是序列表中SEQIDNo.5的单链DNA或其衍生物；所述PCV2‑F为核苷酸序列是序列表中SEQIDNo.6的单链DNA或其衍生物；所述PCV2‑Probe的核苷酸序列是序列表中SEQIDNo.7；所述PCV2‑R为核苷酸序列是序列表中SEQIDNo.8的单链DNA或其衍生物。3.如权利要求1或2所述的双重数字PCR试剂或试剂盒，其特征在于：所述ASFV‑F、ASFV‑R、ASFV‑Probe、PCV2‑F、PCV2‑R和PCV2‑Probe的物质的量比值为分别为2:2:1:2:2:1。4.如权利要求1‑3中任一项所述的双重数字PCR试剂或试剂盒，其特征在于：所述双重数字PCR试剂或试剂盒还包括阳性标准品质粒。5.如4所述的双重数字PCR试剂或试剂盒，其特征在于：所述阳性标准品质粒包括核苷酸序列如SEQIDNo.1所示的DNA分子，和/或所述阳性标准品质粒包括核苷酸序列如SEQIDNo.2所示的DNA分子。6.检测或辅助检测非洲猪瘟病毒和/或猪圆环病毒2型的组合物，所述组合物包括非洲猪瘟病毒引物探针和猪圆环病毒2型引物探针，所述非洲猪瘟病毒引物探针由特异扩增含有核苷酸序列是SEQIDNo.1第75‑173位的片段在内的非洲猪瘟病毒基因组DNA片段的引物和与核苷酸序列是SEQIDNo.1第75‑173位的片段特异结合的探针组成，所述猪圆环病毒2型引物探针由特异扩增含有核苷酸序列是SEQIDNo.2第70‑186位的片段在内的猪圆环病毒2型基因组DNA片段的引物和与核苷酸序列是SEQIDNo.2第70‑186位的片段特异结合的探针组成。7.如权利要求6所述的组合物，其特征在于：所述非洲猪瘟病毒引物探针包括引物ASFV‑F和ASFV‑R、探针ASFV‑Probe，所述猪圆环病毒2型引物探针包括引物PCV2‑F和PCV2‑R、探针PCV2‑Probe，所述ASFV‑F为核苷酸序列是序列表中SEQDNo.3的单链DNA或其衍生物；所述ASFV‑Probe的核苷酸序列是序列表中SEQDNo.4；所述ASFV‑R为核苷酸序列是序列表中SEQDNo.5的单链DNA或其衍生物；所述PCV2‑F为核苷酸序