用于检测镰刀菌的核酸体系、试剂盒及它们在检测或辅助检测镰刀菌中的应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115323068A(43)申请公布日2022.11.11(21)申请号202110513317.5C12R1/77(2006.01)(22)申请日2021.05.11(71)申请人中粮营养健康研究院有限公司地址102209北京市昌平区北七家镇未来科技城南区四路申请人中国农业大学(72)发明人许文涛翟晨王书雅粟元朱龙佼黄昆仑梁志宏(74)专利代理机构北京润平知识产权代理有限公司11283专利代理师刘依云王崇(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12Q1/04(2006.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书7页序列表2页附图2页(54)发明名称用于检测镰刀菌的核酸体系、试剂盒及它们在检测或辅助检测镰刀菌中的应用(57)摘要本发明涉及镰刀菌检测领域，公开了用于检测镰刀菌的核酸体系、试剂盒及它们在检测或辅助检测镰刀菌中的应用。所述核酸体系包含引物对和探针，所述引物对包含如SEQIDNo.1所示的上游引物和如SEQIDNo.2所示的下游引物，所述探针的核苷酸序列如SEQIDNo.3所示。通过本发明所述的引物对和试剂能够快速、特异性地检测镰刀菌，且灵敏度高，能够用于快速检测待测样品中痕量(检测限可低至1.3×10‑8pg/μL)的镰刀菌。CN115323068ACN115323068A权利要求书1/1页1.一种用于检测镰刀菌的核酸体系，其特征在于，所述核酸体系包含引物对和探针，所述引物对包含如SEQIDNo.1所示的上游引物和如SEQIDNo.2所示的下游引物，所述探针的核苷酸序列如SEQIDNo.3所示。2.根据权利要求1所述的核酸体系，其中，所述探针的5’端标记荧光报告基团，3’端标记荧光淬灭基团；优选地，所述荧光报告基团选自羧基荧光素、异硫氰酸荧光素、CY3、CY5、2,7‑二甲基‑4,5‑二氯‑6‑羧基荧光素和六氯‑6‑甲基荧光素中的至少一种；优选地，所述荧光淬灭基团选自羧基四甲基罗丹明和黑洞淬灭剂中的一种。3.一种检测或辅助检测镰刀菌的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含引物对和探针；其中，所述引物对包括其SEQIDNo.1所示的上游引物和如SEQIDNo.2所示的下游引物，所述探针的核苷酸序列如SEQIDNo.3所示。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其中，所述上游引物的浓度为0.25‑1μM，下游引物的浓度为0.25‑1μM，所述探针的浓度为0.125‑0.5μM。5.根据权利要求3所述的试剂盒，其中，所述试剂盒还包括反应缓冲液。6.权利要求1或2所述的核酸体系、或权利要求3‑5中任意一项所述的试剂盒在检测或辅助检测镰刀菌中的应用。7.一种镰刀菌的检测方法，其特征在于，该方法包括：使用权利要求1或2所述的核酸体系或权利要求3‑5中任意一项所述的试剂盒对待测样品的DNA进行荧光定量PCR扩增，得到扩增产物；根据扩增产物是否有荧光信号和/或Ct值的大小判断待测样品中是否含有镰刀菌或检测待测样品中镰刀菌的含量。8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述镰刀菌选自尖孢镰刀菌、禾谷镰刀菌、串珠镰刀菌和层生镰刀菌中的至少一种。9.根据权利要求7或8所述的方法，其中，用于提取所述待测样品DNA的引物对包含如SEQIDNo.4所示的上游引物和如SEQIDNo.5所示的下游引物。10.根据权利要求7所述的方法，其中，在提取所述待测样品的DNA之前，对待测样品进行破碎处理，得到待提取的待测样品；其中，所述破碎处理的方法包括：使用直径为0.8‑3mm的氧化锆玻璃珠研磨所述待测样品0.5‑2min，得到待提取的待测样品。2CN115323068A说明书1/7页用于检测镰刀菌的核酸体系、试剂盒及它们在检测或辅助检测镰刀菌中的应用技术领域[0001]本发明涉及镰刀菌检测领域，具体涉及一种用于检测镰刀菌的核酸体系，一种检测或辅助检测镰刀菌的试剂盒，所述核酸体系或试剂盒在检测或辅助检测镰刀菌中的应用，以及一种镰刀菌的检测方法。背景技术[0002]镰刀菌作为植物病原菌，可侵染玉米和小麦等粮食作物，形成肉眼可见的植物病变，易引起多种植物病害的发生，导致粮食产量下降，对农业经济造成巨大损失。另外，镰刀菌可产生真菌毒素，如玉米赤霉烯酮、伏马菌素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇等，这些毒素可随农作物的加工过程中进入人、畜食物链，能够在整个食物链中稳定传播，造成食物中毒甚至死亡。因此，早期检测和控制镰刀菌，是成功控制植物病害和预防毒素进入食物链的关键。[0003]除提取困难外，对镰刀菌进行检测也是一大难题，这主要是因为在实际检测中镰刀菌形态复杂，易受环境影响发生变异，给实际检测增添了难度。目前，针对镰刀菌的检测方法多使用薄层色谱法、高效液相色谱法、胶体金免疫层析法、酶联免疫