一种鉴定食品中拟枝孢镰刀菌的检测试剂盒及检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105907885A(43)申请公布日2016.08.31(21)申请号201610527870.3(22)申请日2016.04.26(62)分案原申请数据201610265458.92016.04.26(71)申请人张梅地址050015河北省石家庄市长安区和平东路88号(72)发明人张梅(51)Int.Cl.C12Q1/68(2006.01)C12Q1/04(2006.01)权利要求书1页说明书3页序列表2页(54)发明名称一种鉴定食品中拟枝孢镰刀菌的检测试剂盒及检测方法(57)摘要本发明提供了一种用于鉴定食品中的拟枝孢镰刀菌的LAMP检测试剂盒，其包括特异性引物组、BstDNA聚合酶、反应缓冲液和核酸染料。本发明还提供了一种鉴定食品中拟枝孢镰刀菌的LAMP检测方法。使用本发明的试剂盒或检测方法具有高特异性、耗时短、灵敏度高、鉴定简便等优点，值得推广和使用。CN105907885ACN105907885A权利要求书1/1页1.一种用于鉴定食品中的拟枝孢镰刀菌的LAMP检测试剂盒，其特征在于，可以包括特异性引物组、反应缓冲液、BstDNA聚合酶和核酸染料，其中所述引物的核苷酸序列如下所示：外引物F3：CCACATCTTCGGGTCTGTTG(SEQIDNO:1)外引物B3：CCTTGGTGCCAACTTCCATT(SEQIDNO:2)内引物FIP：TGGGAAACGGGCATTTGCTTG-CAGTGCCAAGTCAGCTCAT(SEQIDNO:3)内引物BIP：ACCATATTCGAAAGCGGACGCG-GCAGTCTGGGTAACGACAG(SEQIDNO:4)。2.根据权利要求1所述的拟枝孢镰刀菌的LAMP检测试剂盒，其中所述反应缓冲液由2mMdNTP、10×ThermoPol反应缓冲液、0.6mM甜菜碱和6mMMg2+组成。3.根据权利要求1或2所述的拟枝孢镰刀菌的LAMP检测试剂盒，其中所述核酸染料为1000×SYBRGreenI。4.根据权利要求1-3任一项所述的拟枝孢镰刀菌的LAMP检测试剂盒，其进一步包括DNA提取试剂以及阳性对照和阴性对照。5.根据权利要求4所述的拟枝孢镰刀菌的LAMP检测试剂盒，其中所述DNA提取试剂是CTAB抽提缓冲液。2CN105907885A说明书1/3页一种鉴定食品中拟枝孢镰刀菌的检测试剂盒及检测方法[0001]本发明是申请号为201610265458.9、申请日为2016年4月26日、发明名称为“一种鉴定食品中拟枝孢镰刀菌的检测试剂盒及检测方法”的专利的分案申请。技术领域[0002]本发明涉及微生物检测领域，具体地说，本发明涉及一种用于鉴定食品中的拟枝孢镰刀菌的LAMP检测试剂盒及检测方法。背景技术[0003]拟枝孢镰刀菌(Fusariumsporotrichioides)属于枝孢组镰刀菌，菌丝生长迅速，气生菌丝旺盛，菌落呈放射状，白色至粉红色，菌落背面酒红色至红褐色。气生菌丝上产生有复杂分枝的分生孢子梗，其中大型分生抱子呈镰刀形或纺锤型，通常为3-5个分隔，略弯曲，寄主有黄瓜、玉米、棉花、番痴、辣椒等。[0004]拟枝孢镰刀菌能够产生对人、畜威胁很大的镰刀菌毒素，包括T-2毒素，后者是单端孢霉烯族化合物中的A族，是该类化合物中毒性最强、污染水平较高的毒素之一，可以抑制DNA、RNA及蛋白质合成，诱导细胞凋亡，引起白细胞缺乏等。人类误食了大量污染该类毒素的谷物或蔬菜后，除表现呕吐、腹痛、腹泻等急性症状外，可有白细胞缺乏、坏死性咽峡炎、骨髓发育不良、食管和胃严重坏死等，病死率高(死亡率高达50％-60％)。二战期间前西伯利亚阿穆尔地区数千人因进食了被镰刀菌污染的越冬小麦而发生食物中毒。蒋兆光等曾报道过因食用感染拟枝孢镰刀菌的饲料玉米而导致黄牛中毒的案例。因此，出于食品安全的考虑，有必要开发出检测食品中是否存在拟枝孢镰刀菌的方法或试剂盒。[0005]环介导等温扩增技术(loop-mediatedisothermalamplificationofDNA,LAMP)是日本学者Notomi于2000年建立的一种新型的核酸扩增技术。该技术针对靶基因6个区域设计4条引物，利用具有链置换活性的DNA聚合酶在恒温条件下快速、高特异性地扩增靶基因,产物是两端带有茎环结构的哑铃状DNA分子。与实验室常规检测的PCR方法相比，LAMP技术具有操作简便、灵敏度高、特异性强等优势，在食品、动植物检验检疫中被广泛应用于各种病原检测。发明内容[0006]本发明的目的在于提供一种用于鉴定食品中的拟枝孢镰刀菌的LAMP检测试剂盒及检测方法。[0007]为了实现本发明的目的，在一个方面中，本发明提供一种用于鉴定食品中的拟枝孢镰刀菌的LAMP