一种国兰组培诱导方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115316270A(43)申请公布日2022.11.11(21)申请号202210819528.6(22)申请日2022.07.12(71)申请人北京农业职业学院(中国共产党北京市委员会农村工作委员会党校)地址102445北京市房山区长阳镇稻田南里5号(72)发明人陈兰芬李志莲汤久杨马喆王颖宋彩凤(74)专利代理机构北京众合诚成知识产权代理有限公司11246专利代理师林月俊(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书1页说明书6页(54)发明名称一种国兰组培诱导方法(57)摘要本发明公开了一种国兰组培诱导方法，包括下述步骤：第一步：种子消毒；第二步：种子萌发及龙根诱导；第三步：龙根增殖；第四步：龙根分化出苗；第五步：生根及移栽，第二步种子萌发及龙根诱导以及第三步龙根增殖步骤采用的培养基配方均为：MS培养基+花宝2号4g/L+蛋白胨4g/L+激动素(KT)1mg/L+萘乙酸(NAA)1mg/L+活性炭0.5g/L以及蔗糖30g/L和琼脂6.5g/L，pH值为5.0‑5.5，且培养方式为光照强度为0的暗培养，培养温度为25±2℃。根据本发明的国兰组培诱导方法具有无污染、种子萌发率高、增殖倍数多、根状茎分化率高，大幅降低组培成本等优点。CN115316270ACN115316270A权利要求书1/1页1.一种国兰组培诱导方法，其包括下述步骤：第一步：种子消毒；第二步：种子萌发及龙根诱导；第三步：龙根增殖；第四步：龙根分化出苗；第五步：生根及移栽，其特征在于，第二步种子萌发及龙根诱导以及第三步龙根增殖步骤采用的培养基配方均为：MS培养基+花宝2号4g/L+蛋白胨4g/L+激动素(KT)1mg/L+萘乙酸(NAA)1mg/L+活性炭0.5g/L以及蔗糖30g/L和琼脂6.5g/L，pH值为5.0‑5.5，且培养方式为光照强度为0的暗培养，培养温度为25±2℃。2.根据权利要求1所述的国兰组培诱导方法，其特征在于，第四步龙根分化出苗采用的培养基配方为：MS+花宝2号2g/L+蛋白胨0.25g/L+精氨酸0.05g/L+6‑苄氨基嘌呤(6‑BA)2mg/L+萘乙酸(NAA)0.75mg/L+活性炭0.35g，蔗糖35g/L，琼脂6g/L，pH值5.0‑5.5，培养条件为光照强度1500‑2000LX的光培养。3.根据权利要求2所述的国兰组培诱导方法，其特征在于，第五步生根及移栽采用的培养基配方为：MS+花宝2号1g/L+蛋白胨0.5g/L+吲哚丁酸(IBA)1mg/L+萘乙酸(NAA)1mg/L+活性炭0.75g/L，蔗糖35g/L，琼脂6g/L，pH值为5.4。4.根据权利要求1‑3中任一项所述的国兰组培诱导方法，其特征在于，所述种子消毒步骤为：选择成熟度达70‑80％的国兰蒴果，用水冲洗干净，无菌超净工作台上75％酒精消毒1‑2分钟，再将蒴果果荚放入95％酒精速蘸后取出，在酒精灯处点燃，自然熄灭后重复操作3次。5.根据权利要求2所述的国兰组培诱导方法，其特征在于，所述光培养的光照时长为10‑12小时，温度25±2℃。6.根据权利要求4所述的国兰组培诱导方法，其特征在于，所述暗培养为：将培养基置于培养装置中，以黑色不透光材料覆盖培养装置。7.根据权利要求6所述的国兰组培诱导方法，其特征在于，所述国兰可以是春兰、蕙兰、建兰、墨兰、寒兰、莲瓣兰和春剑中的任一种。2CN115316270A说明书1/6页一种国兰组培诱导方法技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，具体地，本发明涉及植物组织培养技术。特别是，本发明涉及一种国兰组培诱导方法。背景技术[0002]以下对本发明的相关技术背景进行说明，但这些说明并不一定构成本发明的现有技术。[0003]国兰是我国传统名花，具有悠久的栽培历史，其品种主要包括春兰、蕙兰、建兰、墨兰、寒兰、莲瓣兰和春剑等。国兰主要分布于我国的东南地区和西南地区，大部分品种具有较高的观赏价值和开发、利用价值。[0004]但是众所周知，国兰野生资源有限，不能随意采挖。有一些市场化运行的国兰品种单价高，无性繁殖速度慢，也不能满足市场的大量需求。因而，通常以种子作为外植体，进行组织培养，以达到大规模繁殖的目的，而且能有效避免对国兰植株的破坏。然而，国兰的兰花种子非常细小，一个蒴果中有几十万到上百万粒种子，微小种子的胚多未成熟或发育不全，难以提供种子萌发所需要的营养，导致种子在自然条件下萌发率极低。通过组织培养的方法，人工配制合适的培养基，可以有效提高种子萌发率，推广大规模繁殖。[0005]现有技术的方法中，关于种子消毒步骤，一般是在杂交蒴果7‑8分成熟且未开裂时采下，然后进行消毒处理。具体地，例如，用体积分数75％酒精擦洗果实表面，再用质量分数