一种石斛兰的组培快繁方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107711508A(43)申请公布日2018.02.23(21)申请号201711119052.0(22)申请日2017.11.14(71)申请人秦素梅地址541000广西壮族自治区桂林市叠彩区芦笛路南二巷6号1-4(72)发明人秦素梅(74)专利代理机构南宁新途专利代理事务所(普通合伙)45119代理人但玉梅(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书1页说明书6页(54)发明名称一种石斛兰的组培快繁方法(57)摘要本发明提供一种石斛兰的组培快繁方法，属于植物组织培养技术领域。该方法包括外植体的消毒、诱导培养、继代培养及壮苗培养等步骤。其中，外植体的消毒采用酒精消毒和植物消毒液配合消毒的方式，植物消毒液的有效成分是甘草酸、柠檬汁、金银花叶提取物；各个培养阶段中所使用的培养基中添加了辣木叶汁和黄秋葵汁作为营养剂。本发明的方法对外植体的伤害小，且采用本发明提供的培养基配方可显著提高石斛兰的诱导分化率、外植体增殖系数及生根率，缩短培养周期，提高石斛兰组培苗的质量。CN107711508ACN107711508A权利要求书1/1页1.一种石斛兰的组培快繁方法，包括外植体的消毒、诱导培养、继代培养及壮苗培养，其特征在于具体步骤为：(1)外植体的消毒：以正在开花、生长健壮、无病虫害的石斛兰作为母本，切取母本花梗上的花梗芽作为外植体，首先用流水冲洗花梗芽，再用体积浓度为75％的酒精浸泡1-2min，随后将花梗芽表面的苞叶剥去，接着在植物消毒液中浸泡8min-15min后继续剥去一层苞叶，随后在所述植物消毒液中继续浸泡5-10min，用无菌水3-5次，得消毒后的外植体；所述植物消毒液由以下重量份的原料混合制成：甘草酸0.10-0.15份，柠檬汁12-15份，金银花叶提取物0.5-0.8份，吐温-602-4份，水75-100份；(2)诱导培养：将所述消毒后的外植体接种在诱导培养基内，在温度为25±1℃的条件下暗培养10-12天，然后移至光照强度为1500LX的室内，每天光照10-14h的培养35-40天，得石斛兰原球茎；所述诱导培养基的组成为：WPM培养基+玉米素0.5mg/L-0.8mg/L+NAA0.2mg/L-0.3mg/L+琼脂5.0g/L-8.0g/L+蔗糖2.0g/L-4.0g/L+黄秋葵汁5.0g/L-8.0g/L+辣木叶汁12.0g/L-15.0g/L，pH值5.2-5.3；(3)继代培养：将步骤(2)中生长得到的石斛兰原球茎转接入继代培养基内，在温度为25±1℃，光照为1500LX，每天光照10-14h的条件下培养，随着原球茎的生长不断更换培养基，继代培养75-85天后，分化得到大量不定芽；(4)壮苗培养：将石斛兰幼株转接到壮苗培养基中，培养至根数为3-5条，叶片3-4片，苗高4-8cm，即得到生根试管苗；(5)试管苗的移栽：将生根试管苗带瓶盖置于常温条件下炼苗5-7天，打开瓶盖再炼苗2-3天，将生根试管苗从培养瓶中轻轻取出，洗去基部残留的培养基，移栽于以苔藓为基质的穴盘，浇水后保持温度25±2℃，空气湿度70-80％。2.根据权利要求1所述的石斛兰的组培快繁方法，其特征在于：所述继代培养基的组成为：WPM培养基+活性炭1g/L+赤霉素0.5mg/L-0.8mg/L+萘乙酸2mg/L-3mg/L+琼脂5.0g/L-8.0g/L+黄秋葵汁5.0g/L-8.0g/L+辣木叶汁12.0g/L-15.0g/L+蔗糖2.0g/L-4.0g/L，pH值5.5-5.6。3.根据权利要求1所述的石斛兰的组培快繁方法，其特征在于：所述壮苗培养基的组成为：1/2MS+活性炭1g/L+吲哚丁酸0.4mg/L-0.6mg/L+萘乙酸0.5mg/L-0.6mg/L+琼脂5.0g/L-8.0g/L+黄秋葵汁5.0g/L-8.0g/L+辣木叶汁12.0g/L-15.0g/L+蔗糖2.0g/L-4.0g/L，pH值5.5-5.6。4.根据权利要求1-3中任一项所述的石斛兰的组培快繁方法，其特征在于：所述金银花叶提取物的提取方法为：将新鲜金银花叶用8-10倍量的水煎煮2次，每次1.5-2h，合并提取液，过滤浓缩至干。5.根据权利要求1-3中任一项所述的石斛兰的组培快繁方法，其特征在于：所述辣木叶汁的制备方法是：先洗净原料，然后充分捣碎，再用纱布过滤，所述滤液即辣木叶汁。6.根据权利要求1-3中任一项所述的石斛兰的组培快繁方法，其特征在于：所述柠檬汁是将柠檬除去表皮后，用机器搅打成汁得到的；所述黄秋葵汁是将黄秋葵表皮洗净后，用机器搅打成汁得到的。2CN107711508A说明书1/6页一种石斛兰的组培快繁方法【技术领域】[0001]本发明涉及植物组织培养技术领