一种斑舌兰的组培快繁方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107873515A(43)申请公布日2018.04.06(21)申请号201711119060.5(22)申请日2017.11.14(71)申请人秦素梅地址541000广西壮族自治区桂林市叠彩区芦笛路南二巷6号1-4(72)发明人秦素梅(74)专利代理机构南宁新途专利代理事务所(普通合伙)45119代理人但玉梅(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)A01N65/08(2009.01)A01N37/02(2006.01)A01P1/00(2006.01)权利要求书2页说明书6页(54)发明名称一种斑舌兰的组培快繁方法(57)摘要本发明提供一种斑舌兰的组培快繁方法，属于植物组织培养技术领域。该方法包括外植体的消毒、诱导培养、继代培养及壮苗培养等步骤。其中，外植体的消毒采用酒精消毒和植物消毒液配合消毒的方式，植物消毒液的有效成分是乙酰紫草素、仙人掌汁、栀子提取物；各个培养阶段中所使用的培养基中添加了辣木叶汁和黄秋葵汁作为营养剂。本发明的方法对外植体的伤害小，且采用本发明提供的培养基配方可显著提高斑舌兰的诱导分化率、外植体增殖系数及生根率，缩短培养周期，提高斑舌兰组培苗的质量。CN107873515ACN107873515A权利要求书1/2页1.一种斑舌兰的组培快繁方法，包括外植体的消毒、诱导培养、继代培养及壮苗培养，其特征在于具体步骤为：(1)外植体的消毒：采集长度为5-7cm的斑舌兰假鳞茎作为外植体，首先用流水冲洗，再用体积浓度为75％的酒精浸泡1-2min后剥去表面部分叶片，接着在植物消毒液中浸泡8min-15min后继续剥去部分叶片，随后在所述植物消毒液中继续浸泡5-10min，用无菌水冲洗2-4次，最后移入超净工作台内，在解剖镜下剥去剩下的叶片，露出生长点，用解剖刀切取0.5-2mm大小的茎尖分生组织；所述植物消毒液由以下重量份的原料混合制成：乙酰紫草素0.05-0.08份，仙人掌汁8-10份，栀子提取物0.2-0.4份，吐温-602-4份，水75-100份；(2)诱导培养：将所述茎尖分生组织接种在诱导培养基内，在温度为25±1℃的条件下暗培养10-12天，然后移至光照照度为1500LX的室内，每天光照10-14h的培养40-45天，得斑舌兰原球茎；所述诱导培养基的组成为：LS培养基+玉米素0.5mg/L-0.8mg/L+GGR0.1mg/L-0.2mg/L+琼脂5.0g/L-8.0g/L+蔗糖2.0g/L-4.0g/L+黄秋葵汁8.0g/L-12.0g/L+辣木叶汁12.0g/L-15.0g/L，pH值5.2-5.3；(3)继代培养：将步骤(2)中生长得到的斑舌兰原球茎转接入继代培养基内，在温度为25±1℃，光照为1500LX，每天光照10-14h的条件下培养，随着原球茎的生长不断更换培养基，继代培养75-85天后，分化得到大量不定芽；(4)壮苗培养：将斑舌兰幼株转接到壮苗培养基中，培养至根数为3-5条，叶片3-4片，苗高4-8cm，即得到生根试管苗；(5)试管苗的移栽：将生根试管苗带瓶盖置于常温条件下炼苗5-7天，打开瓶盖再炼苗2-3天，将生根试管苗从培养瓶中轻轻取出，洗去基部残留的培养基，移栽于以苔藓为基质的穴盘，浇水后保持温度25±2℃，空气湿度70-80％。2.根据权利要求1所述的斑舌兰的组培快繁方法，其特征在于：所述继代培养基的组成为：LS培养基+活性炭1g/L+赤霉素0.8mg/L-1.0mg/L+GGR0.4mg/L-0.6mg/L+琼脂5.0g/L-8.0g/L+黄秋葵汁8.0g/L-12.0g/L+辣木叶汁12.0g/L-15.0g/L+蔗糖2.0g/L-4.0g/L，pH值5.2-5.3。3.根据权利要求1所述的斑舌兰的组培快繁方法，其特征在于：所述壮苗培养基的组成为：1/3MS+活性炭1g/L+吲哚丁酸0.8mg/L-1.0mg/L+萘乙酸0.3mg/L-0.5mg/L+琼脂5.0g/L-8.0g/L+黄秋葵汁8.0g/L-12.0g/L+辣木叶汁12.0g/L-15.0g/L+蔗糖2.0g/L-4.0g/L，pH值5.4-5.6。4.根据权利要求1-3中任一项所述的斑舌兰的组培快繁方法，其特征在于：栀子提取物是通过以下方法得到的：首先将栀子果实洗净去杂，在真空条件下干燥后，将栀子粉碎，得栀子粉；将栀子粉和氢氧化钙按重量比为95-99:1-5研磨至200-300目，得混合微粉；将混合微粉和体积分数为50-65％的乙醇按料液比1g：20-30ml回流提取2-6次，合并滤液，浓缩、干燥得栀子醇提物；以乙腈-氯仿体积比为3-4：1的混合液为提取剂，向所述栀子醇提物中加入提取剂，提取2-5次，合并提取液，回收所述