一种编码BT蛋白Vip3Aa7的基因及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115851774A(43)申请公布日2023.03.28(21)申请号202211061341.0C07K14/325(2006.01)(22)申请日2022.09.01C12N15/84(2006.01)C12N1/21(2006.01)(71)申请人湖北省农业科学院粮食作物研究所C12N5/10(2006.01)地址430064湖北省武汉市洪山区南湖大A01H6/46(2018.01)道3号A01H5/00(2018.01)申请人湖北省生物农药工程研究中心A01N63/50(2020.01)(72)发明人闸雯俊游艾青王开梅张志刚A01P7/04(2006.01)王月莹周雷李三和陈志军C12R1/01(2006.01)刘凯杨国才刘凯徐华山李培德陈俊孝石少阶吴边李昌焱(74)专利代理机构北京高沃律师事务所11569专利代理师黄明光(51)Int.Cl.C12N15/32(2006.01)权利要求书1页说明书11页序列表（电子公布）附图5页(54)发明名称一种编码BT蛋白Vip3Aa7的基因及其应用(57)摘要本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种编码BT蛋白Vip3Aa7的基因及其应用。本发明通过对编码BT蛋白Vip3Aa7的原始核苷酸序列进行密码子优化，克服不同物种在密码子使用方面存在差异的问题，优化后的核苷酸序列更容易在作物中表达，提高BT蛋白Vip3Aa7在作物中的表达量，进而提高其对农作物害虫的抗性，尤其增强其对草地贪夜蛾的抗性，增加BT蛋白Vip3Aa7的生物用途。CN115851774ACN115851774A权利要求书1/1页1.一种编码BT蛋白Vip3Aa7的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列为如下1)～3)任一项所示的DNA分子：1)由SEQIDNO.1所示的核苷酸组成的DNA分子；2)与1)限定的核苷酸序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且编码上述蛋白的DNA分子；3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码上述蛋白的DNA分子。2.一种重组表达载体，其特征在于，包括权利要求1或2所述的基因。3.根据权利要求2所述的重组表达载体，其特征在于，用于构建所述重组表达载体的初始载体包括质粒载体。4.根据权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于，所述质粒载体包括pBWA(V)HS。5.一种工程菌，其特征在于，包括权利要求1所述的基因或权利要求3～5任一项所述的重组表达载体。6.根据权利要求5所述的工程菌，其特征在于，用于制备所述工程菌的原始菌株为农杆菌。7.一种细胞系，其特征在于，包括权利要求1所述的基因或权利要求3～5任一项所述的重组表达载体。8.根据权利要求7所述的细胞系，其特征在于，所述细胞系为单子叶植物细胞系。9.权利要求1所述的基因、权利要求2～4任一项所述的重组表达载体、权利要求5或6所述的工程菌或权利要求7或8所述的细胞系在下述a)～g)中任一项或多项中的应用：a)防治农作物害虫；b)防治灰翅夜蛾属害虫；c)防治草地贪夜蛾；d)提高作物抗虫性；e)提高禾本科植物抗虫性；f)提高水稻抗虫性；g)制备抗虫剂。2CN115851774A说明书1/11页一种编码BT蛋白Vip3Aa7的基因及其应用技术领域[0001]本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种编码BT蛋白Vip3Aa7的基因及其应用。背景技术[0002]草地贪夜蛾(Spodopterafrugiperda，简称FAW)是对农作物危害较为严重的害虫之一，其入侵性强，破坏性大；隶属于鳞翅目(Lepidoptera)夜蛾科(Noctuidae)。目前，渐分化为两个不同的亚型，已有基因序列的分歧产生，其中一亚型主要以水稻为食，另一亚型则主要以玉米为食。草地贪夜蛾于2016年入侵非洲，造成玉米、甘蔗等作物减产20％～30％，严重受灾区甚至毁种绝收，单单对非洲玉米造成的损失达23.8～61.9亿美元。[0003]为应对草地贪夜蛾，同时避免合成农药对环境的破坏，最佳选择是Bt(苏云金芽孢杆菌)。苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis，简称Bt)是一种革兰氏阳性细菌，它的分布极为广泛，在芽孢形成的同时可形成具有杀虫活性的由蛋白质组成的伴胞晶体，又名杀虫晶体蛋白。目前广泛使用的Bt蛋白有两种，杀虫晶体蛋白(InsecticidalCrystalProtein，ICP)和营养期杀虫蛋白(VegetativeInsecticidalProtein，Vip)。ICP又包括两种，晶体毒素(CrystalProtein，Cry)和细胞裂解素(C