一种Bt蛋白Cry1Ia-like及其编码基因和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111484548A(43)申请公布日2020.08.04(21)申请号202010040780.8A01H5/00(2018.01)(22)申请日2020.01.15A01H6/60(2018.01)A01H6/46(2018.01)(71)申请人四川农业大学A01N47/44(2006.01)地址610000四川省成都市温江区惠民路A01P7/04(2006.01)211号(72)发明人郑爱萍李平孙宏伟邓其明王世全李双成朱军梁越洋(74)专利代理机构成都正华专利代理事务所(普通合伙)51229代理人李蕊(51)Int.Cl.C07K14/325(2006.01)C12N15/32(2006.01)C12N15/82(2006.01)C12N5/10(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表5页附图2页(54)发明名称一种Bt蛋白Cry1Ia-like及其编码基因和应用(57)摘要本发明公开了一种Bt蛋白Cry1Ia-like及其编码基因和应用。该蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示，或如SEQIDNO.2所示的氨基酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸且具有同等活性的氨基酸序列。本发明提供Cry1Ia-like蛋白具有较好的杀虫活性，将其用于制备转基因植物，能够特异性杀灭害虫，并降低农药的使用量，降低成本，减少环境污染。同时，未发现害虫对该蛋白产生抗性的情况。因此，其具有重要的经济价值和应用前景，适合大规模应用于提高植物的抗虫性。CN111484548ACN111484548A权利要求书1/1页1.一种Bt蛋白Cry1Ia-like，其特征在于，所述蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示，或如SEQIDNO.2所示的氨基酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸且具有同等活性的氨基酸序列。2.一种编码权利要求1所述蛋白的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，或如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个核苷酸且具有同等活性的核苷酸序列。3.一种含有权利要求2所述基因的重组表达载体。4.一种含有权利要求4所述重组表达载体的宿主细胞。5.根据权利要求5所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为植物细胞。6.一种杀虫剂，其特征在于，以权利要求1所述蛋白为活性成分，以及其在药学上可接受的辅助成分。7.权利要求1所述蛋白在提高植物抗虫性能中的应用。8.权利要求2所述基因在培育转基因植物、制备杀虫剂或提高植物抗虫性能中的应用。2CN111484548A说明书1/6页一种Bt蛋白Cry1Ia-like及其编码基因和应用技术领域[0001]本发明属于生物技术领域，具体涉及一种Bt蛋白Cry1Ia-like及其编码基因和应用。背景技术[0002]在人类生产过程中，虫害是造成农业生产损失及影响人类健康的重要因素。据FAO统计，全世界农业生产每年因虫害造成的经济损失高达14％，病害损失达12％，草害损失达11％。损失额高达1260亿美元，相当于中国农业总产值的一半，英国的4倍多。为了减少这些损失，多年来，对农作物害虫及蚊虫普遍采用化学防治手段进行防治，但由于化学农药的长期、大量使用，造成了对环境的污染，农副产品中农药残留量增加，给人类的生存和健康带来了危害。此外，化学农药在杀灭害虫的同时，也杀伤了天敌及其它有益物，破坏了生态平衡。与化学防治相比，生物防治具有安全、有效、持久的特点。并且避免了化学防治带来的一系列问题。因此，生物防治技术成了人们研究的热点。在生物杀虫剂中，苏云金芽孢杆菌是目前世界上用途最广、产量最大的一类微生物杀虫剂。[0003]苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis，简称Bt)是一种革兰氏阳性细菌，它的分布极为广泛，在芽孢形成的同时可形成具有杀虫活性的由蛋白质组成的伴胞晶体，又名杀虫晶体蛋白(Insectididalcrystalproteins，简称ICPs)，ICPs是由cry基因编码的，对敏感昆虫有强烈毒性，而对高等动物和人无毒性。目前在农田害虫、森林害虫及卫生害虫的防治中Bt已成为化学合成农药的有力替代品，Bt还是转基因抗虫工程植物重要的基因来源。[0004]自1981年Schnepf从菌株HD-1中克隆了第一个能表达杀虫活性的基因以来，人们已经分离克隆了500多种编码杀虫晶体蛋白的基因，根据编码的氨基酸序列同源性它们被分别确定为不同的群、亚群、类和亚类。一般而言，Cry1,Cry2和Cry9等毒蛋白对鳞翅目害虫有效；其中研究的最多的是Cry1和Cry9类蛋白，它们编码的杀虫晶体蛋白分子量为130-140kD，许多基因目前已被广泛应用于植物的鳞翅目害虫的防