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(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115927741A(43)申请公布日2023.04.07(21)申请号202210794741.6C12R1/93(2006.01)(22)申请日2022.07.07(71)申请人江苏农林职业技术学院地址212400江苏省镇江市句容市文昌东路19号(72)发明人庄林林杨剑波朱孟玲施一成申秋平吴井生宋春雷孙丽谢海强赵彬任希艳(74)专利代理机构南京苏高专利商标事务所(普通合伙)32204专利代理师柏尚春(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/686(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书8页序列表3页附图4页(54)发明名称一种快速检测猴痘病毒的扩增引物、试剂盒及检测方法(57)摘要本发明公开了一种快速检测猴痘病毒的扩增引物、试剂盒及检测方法,所述扩增引物基于猴痘病毒J2R基因特异性保守区域设计,包括正向引物F和反向引物R;所述试剂盒由病毒核酸快速扩增试剂组成,病毒核酸快速扩增试剂包括含有碳基纳米材料的反应缓冲液、猴痘病毒J2R基因快速扩增引物和质控品。利用所述扩增引物或所述试剂盒,采用荧光定量PCR仪可快速检测猴痘病毒。本方法可在35分钟内完成猴痘病毒快速荧光检测。本发明猴痘病毒检测方法操作简便、快速、准确、安全,特异性强、重复性好,有利于实际应用。CN115927741ACN115927741A权利要求书1/1页1.一种快速检测猴痘病毒的扩增引物,其特征在于,所述快速扩增引物基于猴痘病毒J2R基因特异性保守区域设计,包括正向引物F和反向引物R,所述正向引物F为J2R‑F序列,如SEQIDNO:1所示,所述反向引物R为J2R‑R序列,如SEQIDNO:2。2.根据权利要求1所述的快速检测猴痘病毒的扩增引物,其特征在于,所述正向引物J2R‑F序列和反向引物J2R‑R序列的3’末端均仅与猴痘病毒基因组对应碱基匹配。3.根据权利要求1所述的快速检测猴痘病毒的扩增引物,其特征在于,所述正向引物F、反向引物R的浓度为0.1~50μM,所述正向引物F、反向引物R的摩尔比为1:1~1:2。4.一种试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求1~3任一项所述的扩增引物。5.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括碳基纳米材料、扩增缓冲液、BstDNA聚合酶、dNTPs、聚乙二醇、甜菜碱、无酶水、阳性对照和阴性对照。6.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述碳基纳米材料包括氧化石墨烯、还原石墨烯、石墨炔、碳点、碳基介孔纳米材料、碳纳米管或碳纳米笼。7.一种快速检测猴痘病毒的方法,其特征在于,所述检测方法是利用权利要求1‑3任一项所述的扩增引物或权利要求4‑6任一项所述的试剂盒,采用荧光检测方法进行检测猴痘病毒。8.根据权利要求7所述的快速检测猴痘病毒的方法,其特征在于,所诉方法包括以下步骤:在待测液中加入权利要求1‑3任一项所述的扩增引物或权利要求4‑6任一项所述的试剂盒及核酸荧光染料,采用荧光定量PCR仪进行进行扩增分析,当荧光曲线起峰,即荧光值大于0.0001时判定为阳性,当荧光曲线未起峰,即荧光值小于等于0.0001时判定为阴性。9.根据权利要求8所述的快速检测猴痘病毒的方法,其特征在于,所述核酸荧光染料为SYBRGreenI、EvaGreen或SYTO9。10.根据权利要求8所述的快速检测猴痘病毒的方法,其特征在于,采用荧光定量PCR仪进行进行扩增定性分析时,扩增引物的反应温度为两步温度快速循环,第一步温度为辅助变性温度,范围为72~76℃,第二步温度为扩增反应温度,范围为58~65℃,每步温度反应时间为1~10秒,循环数为30~50。2CN115927741A说明书1/8页一种快速检测猴痘病毒的扩增引物、试剂盒及检测方法技术领域[0001]本发明涉及一种快速检测猴痘病毒的扩增引物、试剂盒及检测方法,属于分子生物学检测技术等技术领域。背景技术[0002]猴痘是一种由猴痘病毒(Monkeypoxvirus,MPXV)引起的人畜共患病,被认为是自天花根除以来人类最重要的正痘病毒传染病。猴痘病毒属于痘病毒科正痘病毒属,与天花病毒亲缘性较近且同属双链DNA病毒,形态与正痘病毒一致,外形为圆角砖形或卵圆形,大小为200~400nm,外被脂蛋白膜或封套,中间具有两个含蛋白质的侧体,有1个厚膜核心,核心内含很大的双链DNA基因体。基因组长约197kb,基因组末端包含一个相同但方向相反的末端反向重复序列。病毒经黏膜和破损的皮肤侵入人体。人主要通过接触感染动物病变渗出物、血液、其它体液,或被感染动物咬伤、抓伤而感染。人与人之间主要通过密切接触传播,也可通过飞沫传播,接触被病毒污染的物品也有可能感染,还可通过胎