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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113637805A(43)申请公布日2021.11.12(21)申请号202111095800.2(22)申请日2021.09.18(71)申请人上海市农业科学院地址201403上海市奉贤区金齐路1000号(72)发明人邹小花倪一多高清华段可(74)专利代理机构南京华恒专利代理事务所(普通合伙)32335代理人裴素艳(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/6844(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书10页序列表2页附图8页(54)发明名称一种用于快速检测草莓皱缩病毒的特异性核酸序列及其扩增引物、试剂盒及方法(57)摘要本发明公开一种用于快速检测草莓皱缩病毒(SCV)的特异性核酸序列及其扩增引物、试剂盒及方法。本发明基于草莓皱缩病毒基因组设计草莓皱缩病毒基因组特异性保守序列,同时设计了特异性专用引物。本发明通过筛选草莓皱缩病毒特异保守引物和探针,基于逆转录‑重组酶聚合酶恒温扩增(RT‑nfo‑RPA)方法,优化恒温扩增条件,结合试纸条将扩增产物结果可视化,在探索草莓样本核酸RNA现场快提的基础上,实现草莓皱缩病毒SCV简单、快速、高灵敏检测,并将检测所需试剂和器材组装成易于携带和可供现场使用的试剂盒,适用于草莓种苗繁育、脱毒培养、田间调查时草莓皱缩病毒SCV快速检测和生产应用。CN113637805ACN113637805A权利要求书1/1页1.一种用于快速检测草莓皱缩病毒的特异性核酸序列,其特征在于,所述基因序列如SEQIDNO.11所示。2.用于扩增权利要求1所述的特异性核酸序列的专用引物,其特征在于,包括正向引物和反向引物;所述正向引物的核苷酸序列选自如下序列中的一种:SEQIDNO:1、SEQIDNO:4、SEQIDNO:6或者SEQIDNO:8;所述反向引物的核苷酸序列选自如下序列中的一种:SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:5、SEQIDNO:7或SEQIDNO:9。3.权利要求1所述的特异性核酸序列或权利要求2所述的特异性引物在制备用于检测草莓皱缩病毒的试剂盒上的应用。4.一种快速检测草莓皱缩病毒的试剂盒,其特征在于,包括权利要求2所述的专用引物。5.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,还包括具有SEQIDNO:10所示核苷酸序列的探针。6.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述探针序列的5′端用FAM标记,3′端用C3space标记,从5′端开始计算,第31个碱基‘C’用‑THF‑替代。7.一种快速检测草莓皱缩病毒的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)提取待测草莓样品的总RNA核酸;(2)以步骤(1)的总RNA为模板,利用权利要求2所述的专用引物进行逆转录‑重组酶聚合酶恒温扩增;(3)利用琼脂糖凝胶电泳或者试纸条夹心检测技术对恒温扩增产物进行检测,确定待测草莓样本是否含有草莓轻型黄边病毒。8.根据权利要求7所述的快速检测草莓轻型黄边病毒的方法,其特征在于,步骤(2)中所述逆转录‑重组酶聚合酶恒温扩增的反应体系,以总体积为50µL计,包含2.5‑10µM的正向引物1.5‑2.5µL、10µM的反向引物1.5‑2.5µL和10µM具有SEQIDNO:10所示核苷酸序列的探针0.4‑0.8µL。9.根据权利要求7所述的快速检测草莓轻型黄边病毒的方法,其特征在于,步骤(2)中所述逆转录‑重组酶聚合酶恒温扩增的温度为30‑40℃,反应时间为8‑20min。10.根据权利要求7所述的快速检测草莓轻型黄边病毒的方法,其特征在于,采用柏雷丁生物免提取核酸释放剂NF‑2试剂盒法提取待测草莓样品的基因组总核酸RNA/DNA。2CN113637805A说明书1/10页一种用于快速检测草莓皱缩病毒的特异性核酸序列及其扩增引物、试剂盒及方法技术领域[0001]本发明属于草莓皱缩病毒检测技术领域,具体涉及一种用于快速检测草莓皱缩病毒的特异性核酸序列及其扩增引物、试剂盒及方法。背景技术[0002]草莓(Fragaria×ananassa)为蔷薇科(Rosaceae)草莓属(Fragaria)宿根性多年生草本植物。草莓病毒病在世界各地分布广泛,削弱植株生长势,降低产量和品质,危害草莓生产。目前已报道的可浸染草莓的病毒有20多种,其中草莓皱缩病毒(Strawberrycrinklevirus,SCV)是危害草莓较为严重的一种病毒,也是危害草莓生产的4种主要病毒之一。[0003]由于草莓种苗通过匍匐茎营养繁殖而来,一旦母株带毒,繁殖的后代均带毒。植物病毒病害一旦发生难以控制,造成植株的长势减弱,从而增加了其他病害的浸染几率,若从根本上解决病毒病的危害,需提前对草莓组培苗和种