一种用于副结核分枝杆菌PCR检测的引物组、试剂盒及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115948579A(43)申请公布日2023.04.11(21)申请号202210855519.2C12R1/32(2006.01)(22)申请日2022.07.20(71)申请人黑龙江省农垦科学院地址150001黑龙江省哈尔滨市香坊区香福路101号(72)发明人桑学波师庆伟刁彩霞李长志闫立衡赵晓静葛爱有李伟陶志云佟玲张松王冬宝王野付士强(74)专利代理机构北京高沃律师事务所11569专利代理师张梦泽(51)Int.Cl.C12Q1/689(2018.01)C12Q1/686(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书4页序列表（电子公布）附图2页(54)发明名称一种用于副结核分枝杆菌PCR检测的引物组、试剂盒及其应用(57)摘要本发明提供了一种用于副结核分枝杆菌PCR检测的引物组、试剂盒及其应用，属于分子生物学检测技术领域；所述引物组，包括上游引物和下游引物；所述上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。利用本发明的引物组能够建立副结核分枝杆菌PCR检测方法，该方法比常用的血清检测方法灵敏度高、更准确。CN115948579ACN115948579A权利要求书1/1页1.一种用于副结核分枝杆菌PCR检测的引物组，包括上游引物和下游引物；所述上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。2.用于副结核分枝杆菌PCR检测的试剂盒，包括权利要求1所述的引物组。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR反应缓冲液、dNTPs混合物和DNA聚合酶。4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括阳性对照品和阴性对照品。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照品为牛副结核阳性菌株DNA提取物；所述阴性对照品为双蒸水。6.权利要求1所述的引物组或权利要求2～5任意一项所述的试剂盒在非诊断目的的副结核分枝杆菌PCR检测中的应用。7.一种非诊断目的的副结核分枝杆菌PCR检测方法，包括以下步骤：1)提取待测样品的基因组DNA；2)以待测样品的基因组DNA为模板，利用权利要求1所述引物组进行PCR扩增反应，获得PCR扩增产物；3)对所述PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，若出现一条大小为398bp的明亮条带，判定待测样品中包含副结核分枝杆菌，若没有出现大小为398bp的明亮条带，判定待测样品中不含副结核分枝杆菌。8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，步骤2)中所述PCR扩增反应使用的反应体系以25μL计，包括以下浓度的组分：10×PCR缓冲液2.5μL、2.5mmol/LdNTPs2μL、50μmol上游引物0.5μL、50μmol下游引物0.5μL、DNA聚合酶0.5μL和余量的水。9.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，步骤2)中所述PCR扩增反应的反应程序包括：94℃预变性5min；94℃变性1min，55℃退火1min，72℃延伸1min，共35个循环；72℃复延伸10min。2CN115948579A说明书1/4页一种用于副结核分枝杆菌PCR检测的引物组、试剂盒及其应用技术领域[0001]本发明属于分子生物学检测技术领域，具体涉及一种用于副结核分枝杆菌PCR检测的引物组、试剂盒及其应用。背景技术[0002]牛副结核病是由副结核分枝杆菌引起的，以牛慢性增生性、顽固性肠炎和进行性消瘦为特征的人畜共患传染病。牛副结核病可造成奶牛体重下降、生产性能下降、产乳量降低、及其它多种疾病的产生，给奶牛养殖业带来巨大的经济损失。[0003]目前，牛副结核病的检测方法主要以临床和病理学检查等为主，缺乏快速、敏感的检测手段。细菌学检测为目前世界上认可推荐使用的标准方法，但是该方法存在耗时长(8周以上)，培养时间长及易受到其他抗酸菌干扰，从而影响副结核分枝杆菌的检测。发明内容[0004]有鉴于此，本发明的目的在于提供一种用于副结核分枝杆菌PCR检测的引物组、试剂盒及其应用，本发明能够实现副结核分枝杆菌快速特异性检测。[0005]本发明提供了一种用于副结核分枝杆菌PCR检测的引物组，包括上游引物和下游引物；所述上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。[0006]本发明还提供了用于副结核分枝杆菌PCR检测的试剂盒，包括上述方案所述的引物组。[0007]优选的，所述试剂盒还包括PCR反应缓冲液、dNTPs混合物和DNA聚合酶。[0008]优选的，所述试剂盒中还包括阳性对照品和阴性对照品。[0009]优选的，所述阳性对照品为牛副结核阳性菌株DNA提