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本发明涉及支原体检测领域,特别是涉及一种用于支原体检测的PCR引物组及试剂盒,所述PCR引物组包括上游引物与下游引物:上游引物包括SEQIDNO:7或SEQIDNO:8,或与所述SEQIDNO:7或8具有至少70%,至少75%,至少80%,至少85%,更优选至少90%,至少95%以上同一性的序列;下游引物包括SEQIDNO:4、SEQIDNO:6或SEQIDNO:9,或与所述SEQIDNO:4/6/9具有70%,至少75%,至少80%,至少85%,至少90%,至少95%以上同一性的序列。所述支原体检测试剂盒包括所述PCR引物组、聚合酶混合物、支原体标准品、阴性对照。本发明的PCR引物组及试剂盒,操作简单,检测高效灵敏,仅需一对引物和一次PCR反应便可同时全部检测到中国、日本、美国、欧洲药典包含的9种和常见的1种支原体。