用于结核分枝杆菌复合群的CRISPR检测引物组及其用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109811072A(43)申请公布日2019.05.28(21)申请号201910150399.4C12R1/32(2006.01)(22)申请日2019.02.28(71)申请人广州微远基因科技有限公司地址510130广东省广州市高新技术产业开发区科丰路31号自编三栋华南新材料创新园G10栋303号(72)发明人许腾曾伟奇杨敏玲周叙全王小锐李永军苏杭(74)专利代理机构广州新诺专利商标事务所有限公司44100代理人李海恬(51)Int.Cl.C12Q1/689(2018.01)C12N15/11(2006.01)C12Q1/6844(2018.01)权利要求书1页说明书9页序列表6页附图2页(54)发明名称用于结核分枝杆菌复合群的CRISPR检测引物组及其用途(57)摘要本发明涉及一种用于结核分枝杆菌复合群的CRISPR检测引物组及其用途，属于基因检测技术领域。该引物组包括扩增引物对和crRNA；所述扩增引物对用于扩增结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌、坎纳分支杆菌和田鼠分枝杆菌的共有保守序列；所述crRNA包括锚定序列和向导序列，所述锚定序列与cas蛋白结合，所述向导序列与所述共有保守序列中的靶向RNA片段相匹配。通过上述基于CRISPR检测技术的引物组，以CRISPR检测针对结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌、坎纳分支杆菌和田鼠分枝杆菌的共有保守序列进行基因检测，能够快速进行结核分枝杆菌复合群的现场检测，且具有特异高、灵敏高、简易的优点。CN109811072ACN109811072A权利要求书1/1页1.一种用于结核分枝杆菌复合群的CRISPR检测引物组，其特征在于，包括扩增引物对和crRNA；所述扩增引物对用于扩增结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌、坎纳分支杆菌和田鼠分枝杆菌的共有保守序列；所述crRNA包括锚定序列和向导序列，所述锚定序列与cas蛋白结合，所述向导序列与所述共有保守序列中的靶向DNA片段相匹配。2.根据权利要求1所述的用于结核分枝杆菌复合群的CRISPR检测引物组，其特征在于，所述共有保守序列如SEQIDNO:1所示。3.根据权利要求1所述的用于结核分枝杆菌复合群的CRISPR检测引物组，其特征在于，所述向导序列如SEQIDNO:2所示。4.根据权利要求3所述的用于结核分枝杆菌复合群的CRISPR检测引物组，其特征在于，所述crRNA序列如SEQIDNO:3所示。5.根据权利要求3-4任一项所述的用于结核分枝杆菌复合群的CRISPR检测引物组，其特征在于，所述扩增引物对如下：正向扩增引物：5’-GGTCGGAAGCTCCTATGACAATGCACTAGCC-3’(SEQIDNO:4)反向扩增引物：5’-TTGAGCGTAGTAGGCAGCCTCGAGTTCGAC-3’(SEQIDNO:5)。6.权利要求1-5任一项所述的用于结核分枝杆菌复合群的CRISPR检测引物组在开发和/或制备具有结核诊断和/或预后评估用途的产品中的应用。7.一种用于检测结核分枝杆菌复合群的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-5任一项所述的用于结核分枝杆菌复合群的CRISPR检测引物组。8.根据权利要求7所述的用于检测结核分枝杆菌复合群的试剂盒，其特征在于，还包括cas12a蛋白，信号报告探针。9.根据权利要求7所述的用于检测结核分枝杆菌复合群的试剂盒，其特征在于，所述cas12a蛋白为LbCas12a；所述信号报告探针序列为：5’-6-FAM-TTTTTTTTTTTT-BHQ1-3’。10.一种非诊断治疗目的结核分枝杆菌复合群检测方法，其特征在于，包括以下步骤：样本提取：取待测样本，提取其中DNA；RPA扩增：以权利要求1-5任一项中的扩增引物，通过RPA方法扩增上述提取得到的待测样本DNA，得扩增产物；CRISPR反应检测：取上述扩增产物，加入信号报告探针、cas蛋白和权利要求1-5任一项中的crRNA，进行CRISPR反应检测，读取检测信号，即得。2CN109811072A说明书1/9页用于结核分枝杆菌复合群的CRISPR检测引物组及其用途技术领域[0001]本发明涉及基于CRISPR技术的基因检测技术领域，特别是涉及一种用于结核分枝杆菌复合群的CRISPR检测引物组及其用途。背景技术[0002]结核病(tuberculosis，TB)是全世界死亡人口的十大死因之一。据世界卫生组织(worldhealthorganization,WHO)报告，2016年全球估计新发结核病1040万例，其中仅有630万例得到发现和报告，尚存在410万例的差距(数据源于《2017年全球结核病报告》)。因此，结核病的防控关系到国家的公共卫生安全，而控制结