小麦千粒重主效QTL的KASP分子标记及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115976263A(43)申请公布日2023.04.18(21)申请号202211639381.9(22)申请日2022.12.19(71)申请人中国农业大学地址100091北京市海淀区圆明园西路2号(72)发明人宿振起贺茜付真刘继鲁朱珍珍倪中福孙其信(74)专利代理机构重庆信航知识产权代理有限公司50218专利代理师孔垂烛(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12N15/11(2006.01)C12Q1/6858(2018.01)权利要求书2页说明书7页序列表（电子公布）附图3页(54)发明名称小麦千粒重主效QTL的KASP分子标记及其应用(57)摘要本发明涉及小麦千粒重主效QTL的KASP分子标记及其应用，主效QTL定位于小麦3D染色体长臂，命名为QTgw.cau‑3D；所述QTgw.cau‑3D包括两个连锁的KASP分子标记为KASP.cau‑3D.1和KASP.cau‑3D.2，对应物理位置为3D：553,396,779‑558,737,727，遗传距离为2.8cM。该千粒重QTL位点LOD值5.32～6.58，表型变异贡献率为9.03～11.86％，加性效应为1.26～1.82g。CN115976263ACN115976263A权利要求书1/2页1.小麦千粒重主效QTL的KASP分子标记，其特征在于，所述主效QTL定位于小麦3D染色体长臂上，命名为QTgw.cau‑3D；所述QTgw.cau‑3D包括两个连锁的KASP分子标记KASP.cau‑3D.1和KASP.cau‑3D.2，对应物理位置为3D：553,396,779‑558,737,727，遗传距离为2.8cM；该千粒重QTL位点LOD值5.32～6.58，表型变异贡献率为9.03～11.86％，加性效应为1.26～1.82g；千粒重QTL位点的增效等位变异来自于亲本冀麦120。2.根据权利要求1所述的所述的小麦千粒重主效QTL的KASP分子标记，其特征在于，其正向引物1和正向引物2的5’末端分别连上FAM和HEX荧光基团接头；所述KASP分子标记KASP.cau‑3D.1和KASP.cau‑3D.2，具体引物序列分别如下：①KASP.cau‑3D.1的引物序列正向引物1：5’‑GAAGGTGACCAAGTTCATGCTCGACAAGTGGGATGGGCTT‑3’，如SEQIDNO.1所示；正向引物2：5’‑GAAGGTCGGAGTCAACGGATTCGACAAGTGGGATGGGCTC‑3’，如SEQIDNO.2所示；共用反向引物：5’‑TTCTTGCACCCGATCAACCA‑3’，如SEQIDNO.3所示；②KASP.cau‑3D.2的引物序列正向引物1：5’‑GAAGGTGACCAAGTTCATGCTTCGATGGATGTTTCCCAAATTTA‑3’，如SEQIDNO.4所示；正向引物2：5’‑GAAGGTCGGAGTCAACGGATTTCGATGGATGTTTCCCAAATTTG‑3’，如SEQIDNO.5所示；共用反向引物：5’‑AGCGTTCAACGACTTTGGAA‑3’，如SEQIDNO.6所示。3.根据权利要求1所述的所述的小麦千粒重主效QTL的KASP分子标记，其特征在于，所述小麦千粒重主效QTL的基因分型方法，具体步骤如下：提取小麦基因组DNA，用序列SEQIDNO.1、SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示的KASP.cau‑3D.1标记的KASP引物或SEQIDNO.4、SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示的KASP.cau‑3D.2的KASP标记引物序列对提取的基因组DNA进行PCR扩增。4.根据权利要求3所述的所述的小麦千粒重主效QTL的KASP分子标记，其特征在于，所述PCR扩增方法为：PCR反应体系：每孔DNA使用量为50‑100ng，KASP引物混合物0.1μl，HiGeno2×ProbeMix4.0μl；无菌水补至8μl；PCR反应程序：95℃预变性10min；95℃变性20s，61‑55℃退火/延伸40s，其中，61‑55℃梯度PCR，每循环降低‑0.6℃，共10个循环；95℃变性20s，55℃退火/延伸40s，共28～34个循环；12℃保存；KASP引物混合物包括：FAM正向引物、HEX正向引物、反向引物和无菌水；所述FMA正向引物浓度为12μmol/ml，所述HEX正向引物浓度为12μmol/ml，所述反向引物浓度为30μmol/ml。5.权利要求1～4中任一项所述小麦千粒重主效QTL的KASP分子标记在小麦高产育种中的应用。6.权利要求1～4中任一项所述小麦千粒重主效QTL的KASP分子标记在高千粒重小麦育种中的