小麦条锈病苗期抗性主效QTL的AQP分子标记、其引物及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115961079A(43)申请公布日2023.04.14(21)申请号202211673187.2(22)申请日2022.12.26(71)申请人河南农业大学地址450002河南省郑州市金水区农业路63号(72)发明人唐建卫高艳殷贵鸿李俣佳许豪(74)专利代理机构郑州盈派知识产权代理事务所(普通合伙)41196专利代理师樊羿张晓辉(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12Q1/6858(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图1页(54)发明名称小麦条锈病苗期抗性主效QTL的AQP分子标记、其引物及其应用(57)摘要本申请公开了一种小麦条锈病苗期抗性主效QTL的AQP分子标记、其引物及其应用，旨在解决当前缺乏对CYR34具有稳定抗性QTL的技术问题。本申请主效QTL为定位于小麦第七染色体长臂上AX‑111630305～AX‑109458466之间0.34cM区间内的QYr.hau‑S‑7BL，在该QYr.hau‑S‑7BL上控制条锈病苗期抗性的主效QTL紧密连锁的物理区间内部物理图谱718.77Mb处存在SNP标记AX‑108877192，其与所述主效QTL的遗传距离为0.76cM。本申请所得AQP分子标记定位的QTL遗传效应较大且稳定（遗传效应均值达到32.4），AQP分子标记与目标QTL连锁紧密，能够满足分子育种的需求。CN115961079ACN115961079A权利要求书1/1页1.一种小麦条锈病苗期抗性主效QTL的AQP分子标记，所述主效QTL为定位于小麦第七染色体长臂上的QYr.hau‑S‑7BL，其包含两个连锁的SNP分子标记AX‑111630305和AX‑109458466，所述QYr.hau‑S‑7BL定位于AX‑111630305～AX‑109458466之间的0.34cM区间内，对应于中国春RefSeq_v1.0参考基因组717.89～720.32Mb的物理图谱内。2.一种小麦条锈病苗期抗性主效QTL的AQP分子标记，所述主效QTL为定位于小麦第七染色体长臂上AX‑111630305～AX‑109458466之间0.34cM区间内的QYr.hau‑S‑7BL，在该QYr.hau‑S‑7BL上控制条锈病苗期抗性的主效QTL紧密连锁的物理区间内部物理图谱718.77Mb处存在SNP标记AX‑108877192，其与所述主效QTL的遗传距离为0.76cM。3.一种AQP分子标记引物，其引物序列如下：。4.一种检测试剂盒，含有权利要求3所述的AQP分子标记引物。5.权利要求1所述AQP分子标记、权利要求2所述AQP分子标记、权利要求3所述AQP分子标记引物或权利要求4所述检测试剂盒在小麦育种中的应用。6.权利要求1所述AQP分子标记、权利要求2所述AQP分子标记、权利要求3所述AQP分子标记引物或权利要求4所述检测试剂盒在小麦条锈病抗性鉴定中的应用。7.权利要求1所述AQP分子标记、权利要求2所述AQP分子标记、权利要求3所述AQP分子标记引物或权利要求4所述检测试剂盒在小麦条锈病苗期抗性主效QTL的基因分型中的应用。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：（1）提取小麦基因组DNA；（2）以AX‑108877192的AQP标记引物对提取的基因组DNA进行PCR扩增，并收集扩增产物终点荧光信号后进行相应分析；（3）基因分型：对样品进行聚类分簇，进一步根据样品簇确定基因型。9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增的步骤包括：PCR反应体系：包括浓度为100ng/uL的模板DNA4uL，HiGeno2xProbeMixA与AQPPrimerMix混合物4uL，共计8uL；PCR反应程序：95℃预变性10min；第一步扩增反应：95℃变性20s，61℃梯度退火并延伸40s，10个循环，每个循环的退火温度降低0.6℃；第二步扩增反应：95℃变性20s，55℃退火并延伸40s，28～34个循环；25℃保存；AQP引物混合物包括：FAM正向引物、HEX正向引物、反向引物和纯化水；所述FAM正向引物浓度为12uM，所述HEX正向引物浓度为12uM，所述反向引物浓度为30uM；检测结果分析：在35℃下使用实时荧光定量PCR仪收集扩增产物终点荧光信号，并通过QuantStudioTMDesign&AnalysisSoftwarev1.4.3实现数据可视化。2CN115961079A说明书1/5页小麦条锈病苗期抗性主效QTL的AQP分子标记、其引物及其应用技术领域[0001]本申请涉及基因工程技术领域，具体涉及一种小麦条锈病苗期抗性主效QTL的AQP分子标记、其引物及其应