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(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN116004698A(43)申请公布日2023.04.25(21)申请号202210908649.8A01P21/00(2006.01)(22)申请日2022.07.29C12R1/645(2006.01)(71)申请人中国农业科学院植物保护研究所地址100193北京市海淀区北京市圆明园西路2号(72)发明人李冉戴小枫薛绘杉陈捷胤张丹丹孔志强刘晓炜(74)专利代理机构北京英创嘉友知识产权代理事务所(普通合伙)11447专利代理师杨月(51)Int.Cl.C12N15/80(2006.01)C12N15/113(2010.01)C12N1/15(2006.01)A01N57/16(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表(电子公布)附图4页(54)发明名称一种大丽轮枝菌lncRNA28816基因敲除重组载体及其制备方法和应用(57)摘要本发明提供一种lncRNA28816基因敲除重组载体及其制备方法和应用,所述lncRNA28816基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。利用该lncRNA28816基因敲除重组载体能够有效降低大丽轮枝菌对作物的致病力,提高作物对大丽轮枝菌的抗性。CN116004698ACN116004698A权利要求书1/1页1.一种lncRNA28816基因敲除重组载体,其特征在于,所述lncRNA28816基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。2.根据权利要求1所述的lncRNA28816基因敲除重组载体,其中,所述lncRNA28816基因敲除重组载体中,所述lncRNA28816基因由潮霉素基因替换,所述潮霉素基因的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。3.根据权利要求1所述的lncRNA28816基因敲除重组载体,其中,所述lncRNA28816基因敲除重组载体的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。4.根据权利要求3所述的lncRNA28816基因敲除重组载体,其中,所述lncRNA28816基因敲除重组载体为lncRNA28816基因敲除重组表达载体,所述lncRNA28816基因敲除重组表达载体中插入有表达框,所述表达框的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示。5.权利要求1‑4中任一项所述lncRNA28816基因敲除重组载体的制备方法,其特征在于,该制备方法包括以下步骤:S1、以大丽轮枝菌的DNA为模板,利用特异性引物进行PCR扩增,得到lncRNA28816基因上游和下游片段;S2、将所述lncRNA28816基因上游和下游片段分别连接至pCH表达载体和潮霉素基因的5’端和3’端,得到所述lncRNA28816基因敲除重组载体。6.根据权利要求5所述的制备方法,其中,所述特异性引物序列如SEQIDNO.5‑8所示。7.一种大丽轮枝菌lncRNA28816基因缺失菌株。8.一种大丽轮枝菌lncRNAC28816基因缺失菌株的制备方法,其特征在于,该制备方法包括:将权利要求1‑4中任一项所述lncRNAC28816基因敲除重组载体导入大丽轮枝菌株。9.一种提高作物对大丽轮枝菌抗性的方法,其特征在于,该方法包括:将权利要求8所述大丽轮枝菌lncRNA28816基因缺失菌株附着在所述作物上,和/或,将所述作物与权利要求8所述大丽轮枝菌lncRNA28816基因缺失菌株共培养。10.根据权利要求9所述的方法,其中,所述作物包括棉花。2CN116004698A说明书1/6页一种大丽轮枝菌lncRNA28816基因敲除重组载体及其制备方法和应用技术领域[0001]本申请属于微生物技术领域,具体地,涉及一种lncRNA28816基因敲除重组载体及其制备方法、一种大丽轮枝菌lncRNA28816基因缺失菌株及其制备方法、一种提高作物对大丽轮枝菌抗性的方法。背景技术[0002]长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度大于200nt的核酸分子,通常以调控基因表达、表观遗传等形式广泛参与生物体的各种生理和病理过程。相对于动植物lncRNA而言,真菌lncRNA仅在酵母、木霉等有相关研究参与了应激反应、细胞周期调控、基因沉默等生物学过程,而在病原真菌的研究少见报道。大丽轮枝菌作为农作物生产上重大的土传病原真菌,关于致病相关基因(效应子、转录因子等)及其为害机制已被广泛研究。有研究发现,稻曲病菌UvlncNAT‑MFS通过与UvMFS形成RNA双链体参与稻瘟菌生长发育及胁迫响应等生命过程;禾谷镰刀菌GzmetE‑AS通过RNAi途径调控GzmetE基因表达参与禾谷镰刀菌有性繁殖和无性繁殖。但是目前还没有关于大丽轮枝菌具有致病功能lncRNA的相关报道。发明内容[0003]本公开的目的是针对现有技术中大丽轮枝菌侵染植物引起严重症状等问题,提供一种ln