大丽轮枝菌VdNRPS2基因抗病原菌靶基因片段及其干扰载体和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114736915A(43)申请公布日2022.07.12(21)申请号202210669390.6A01H6/82(2018.01)(22)申请日2022.06.14(71)申请人中国农业科学院生物技术研究所地址100081北京市海淀区中关村南大街12号中国农科院生物所(72)发明人苏晓峰王琦刘璐潘国强吴思源郭惠明程红梅吕依然刘海洋(74)专利代理机构北京思元知识产权代理事务所(普通合伙)11598专利代理师余光军霍雪梅(51)Int.Cl.C12N15/31(2006.01)C12N15/84(2006.01)A01H5/00(2018.01)权利要求书1页说明书10页序列表2页附图7页(54)发明名称大丽轮枝菌VdNRPS2基因抗病原菌靶基因片段及其干扰载体和应用(57)摘要本发明公开了大丽轮枝菌VdNRPS2基因抗病原菌靶基因片段及其干扰载体和应用。本发明提供了大丽轮枝菌VdNRPS2基因抗病原菌靶基因片段，其核苷酸序列分别为SEQIDNo.1、SEQIDNo.3或SEQIDNo.5所示。本发明进一步提供了采用所述靶基因片段构建的Gateway干扰载体。本发明提供的大丽轮枝菌VdNRPS2基因抗病原菌靶基因片段以及采用该靶基因片段所构建的Gateway干扰载体能应用于提高作物对大丽轮枝菌所导致病害的抗性以及培育抗大丽轮枝菌的转基因植物新品种等方面。CN114736915ACN114736915A权利要求书1/1页1.大丽轮枝菌（Verticilliumdahliae）VdNRPS2基因抗病原菌靶基因片段，其特征在于：其核苷酸序列为SEQIDNo.1、SEQIDNo.3或SEQIDNo.5所示。2.根据权利要求1所述的大丽轮枝菌VdNRPS2基因抗病原菌靶基因片段，其特征在于：其核苷酸序列为SEQIDNo.1所示。3.由权利要求1或2所述大丽轮枝菌VdNRPS2基因抗病原菌靶基因片段所转录的dsRNA。4.含有权利要求1或2所述大丽轮枝菌VdNRPS2基因抗病原菌靶基因片段的RNA干扰载体；其中，所述RNA干扰载体是Gateway干扰载体。5.一种构建权利要求4所述RNA干扰载体的方法，其特征在于，包括：将权利要求1或2所述的大丽轮枝菌VdNRPS2基因抗病原菌靶基因片段插入到Gateway干扰载体，即得。6.权利要求1或2所述大丽轮枝菌VdNRPS2基因抗病原菌靶基因片段在提高植物对大丽轮枝菌所导致病害抗性中的应用。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：（1）构建含有权利要求1或2所述大丽轮枝菌VdNRPS2基因抗病原菌靶基因片段的Gateway干扰载体；（2）将所构建的Gateway干扰载体转化到植物或植物细胞中；（3）筛选获得对大丽轮枝菌所导致病害抗性提高的转基因植物。8.权利要求4所述RNA干扰载体在提高植物对大丽轮枝菌所导致疾病的抗性中的应用，包括：（1）将所述RNA干扰载体转化到植物或植物细胞中；（2）筛选获得对大丽轮枝菌所导致疾病抗性提高的转基因植物。9.一种培育抗大丽轮枝菌所导致病害的转基因植物新品种的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）构建含有权利要求1或2所述大丽轮枝菌VdNRPS2基因抗病原菌靶基因片段的RNA干扰载体；（2）将所构建的RNA干扰载体转化到植物或植物细胞中；（3）筛选获得对大丽轮枝菌所导致疾病抗性提高的转基因植物新品种。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述植物为大丽轮枝菌的寄主植物，包括但不限于烟草、棉花、番茄、马铃薯、甜瓜、西瓜、黄瓜或花生中的任意一种。2CN114736915A说明书1/10页大丽轮枝菌VdNRPS2基因抗病原菌靶基因片段及其干扰载体和应用技术领域[0001]本发明涉及大丽轮枝菌抗病原菌靶基因片段以及含有所述靶基因片段的RNA干扰载体，尤其涉及大丽轮枝菌VdNRPS2基因抗病原菌靶基因片段以及采用所述抗病原菌靶基因片段构建的RNA干扰载体及其在提高作物或蔬菜抗病性中的应用，属于大丽轮枝菌抗病原菌靶基因片段及抗病性应用领域。背景技术[0002]棉花黄萎病（CottonVerticilliumWilt）被称为“棉花癌症”，在很多国家使棉花平均减产10‑35%，严重危害棉花生产，造成了巨大的经济损失。其致病菌为大丽轮枝菌（Verticilliumdahliae），它具有很强的致病性，在整个棉花生长阶段内，它都能够进行侵染，导致棉花出现叶片萎蔫、变黄等现象；发病严重时，整个棉花叶片枯焦破碎，最终死亡。同时，它的寄主植物范围较为广泛，能够侵染的植物种类达六百多种，包括一年生草本植物、多年生草本植物和木本植物，其中不乏十字花科、茄科、菊科和蔷薇科等多种具有重要经济价值的农作物、苗木