分泌抗牛病毒性腹泻病毒E2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN116004549A(43)申请公布日2023.04.25(21)申请号202211630235.XC07K16/10(2006.01)(22)申请日2022.12.19G01N33/577(2006.01)G01N33/569(2006.01)(83)生物保藏信息G01N33/58(2006.01)CCTCCNO：C20223482022.12.13A61K39/42(2006.01)(71)申请人江苏省农业科学院A61P31/14(2006.01)地址210014江苏省南京市玄武区钟灵街C12R1/91(2006.01)50号(72)发明人李文良张纹纹何苗锋毛立程子龙刘鑫欢杨蕾蕾刘茂军白娟姜焱祝贺(74)专利代理机构南京汇盛专利商标事务所(普通合伙)32238专利代理师袁静(51)Int.Cl.权利要求书1页说明书10页C12N5/20(2006.01)序列表（电子公布）附图2页(54)发明名称分泌抗牛病毒性腹泻病毒E2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用(57)摘要本发明提供分泌抗牛病毒性腹泻病毒E2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于生物技术领域。杂交瘤细胞株1E2B3，保藏编号为CCTCCNO：C2022348。本发明还提供该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体及其在制备检测牛病毒性腹泻病毒E2蛋白抗体的试剂盒、制备BVDV‑1特异性治疗剂和抗原检测试剂等方面的应用。本发明杂交瘤细胞株能够产生针对BVDV‑1E2蛋白的单克隆抗体。该单克隆抗体的阻断ELISA方法可用于病毒感染与灭活疫苗免疫抗体的检测；该单克隆抗体具有中和病毒的活性，可用于BVDV相关疾病治疗制剂的研发；该单克隆抗体具有良好的反应性可用于Westernblot检测和免疫荧光检测。CN116004549ACN116004549A权利要求书1/1页1.分泌抗牛病毒性腹泻病毒E2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株1E2B3，其保藏编号为CCTCCNO：C2022348。2.权利要求1所述杂交瘤细胞株1E2B3分泌的抗牛病毒性腹泻病毒E2蛋白单克隆抗体。3.权利要求2所述抗牛病毒性腹泻病毒E2蛋白单克隆抗体在制备检测牛病毒性腹泻病毒E2蛋白抗体的试剂盒方面的应用。4.根据权利要求3所述应用，其特征在于所述抗牛病毒性腹泻病毒E2蛋白单克隆抗体经HRP标记。5.权利要求2所述抗牛病毒性腹泻病毒E2蛋白单克隆抗体在制备BVDV‑1特异性治疗剂方面的应用。6.权利要求2所述抗牛病毒性腹泻病毒E2蛋白单克隆抗体在制备BVDV‑1抗原检测试剂方面的应用。7.根据权利要求6所述应用，其特征在于所述BVDV‑1抗原检测试剂用于BVDV‑1抗原的Westernblot检测和间接免疫荧光检测。8.权利要求2所述单克隆抗体的制备方法，其特征在于包括如下步骤：将所述杂交瘤细胞1E2B3注射到BALB/c小鼠腹腔，制备腹水，离心并收集腹水上清液，纯化后得到。2CN116004549A说明书1/10页分泌抗牛病毒性腹泻病毒E2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用技术领域[0001]本发明属于生物技术领域，涉及分泌抗牛病毒性腹泻病毒E2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。背景技术[0002]牛病毒性腹泻病毒(bovineviraldiarrheavirus，BVDV)属于黄病毒科(Flaviviridae)、瘟病毒属(Pestivirus)，能感染牛引起牛病毒性腹泻‑粘膜病(Bovineviraldiarrhea‑mucosaldisease，BVD‑MD)。该病临床症状表现复杂、多样，以腹泻、发热、粘膜糜烂溃疡、怀孕母牛流产、产死胎或畸胎等症状为主要特征。它还能继发细菌、支原体等感染，造成严重损失。此外，该病毒能够经胎盘传播，产出持续感染牛(PI牛)，PI牛常年带毒、排毒，在畜群中成为主要感染源。除了牛，BVDV还可感染猪、山羊、绵羊等多种家畜，流行广泛，危害较大。BVDV包含BVDV‑1和BVDV‑2两种型，基于对病毒5′UTR序列的分析，并综合分析其他基因组区域，如Npro或E2，目前已鉴定出21个BVDV‑1亚型(a‑u)、4个BVDV‑2亚型(a‑d)。[0003]牛病毒性腹泻‑粘膜病尚无特效药物。疫苗免疫、鉴定及扑杀感染牛和PI牛，是控制BVD的重要手段。目前国内已有BVDV的灭活疫苗上市并广泛使用。针对该病毒目前有多种检测方法，病原学检测方法包括病毒分离、间接免疫荧光、RT‑PCR和荧光定量RT‑PCR以及ELISA，血清学检测方法主要有中和试验和ELISA。基于单克隆抗体的检测方法具有很强的特异性，大大提高检测结果的准确性和可靠性。目前检测BVDV多采用RT‑PCR等核酸检测方法，缺乏针对病毒抗原的检测方法。ELIS