一种富含大豆异黄酮苷元的发酵饮料的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113558193A(43)申请公布日2021.10.29(21)申请号202110704175.0C12N15/56(2006.01)(22)申请日2021.06.24C12N15/74(2006.01)C12R1/01(2006.01)(71)申请人苏州大学地址215137江苏省苏州市相城区济学路8号(72)发明人李笃信郭妍伍锦林芷芊张真庆(74)专利代理机构苏州翔远专利代理事务所(普通合伙)32251代理人陆金星(51)Int.Cl.A23L11/65(2021.01)A23L11/50(2021.01)A23L33/00(2016.01)C12N1/21(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图1页(54)发明名称一种富含大豆异黄酮苷元的发酵饮料的制备方法(57)摘要本发明公开了一种富含大豆异黄酮苷元的发酵饮料的制备方法，包括以下步骤：1)高产β‑葡萄糖苷酶的重组乳酸菌的构建；2)大豆相关原料的预处理，接种重组乳酸菌进行发酵，灭菌和罐装。本发明利用基因工程技术对乳酸菌进行改造，避免传统技术的盲目性，减少大量筛选检测工作，获得高产β‑葡萄糖苷酶的重组乳酸菌，促使乳酸菌在发酵过程中大量产生β‑葡萄糖苷酶，极大促进糖苷型大豆异黄酮向苷元型大豆异黄酮的转化，为制作富含大豆异黄酮苷元的功能性饮料提供新思路。CN113558193ACN113558193A权利要求书1/1页1.一种富含大豆异黄酮苷元的发酵饮料的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)根据乳酸乳球菌β‑葡萄糖苷酶的基因组DNA序列设计PCR引物；(2)使用DNAiso从乳酸乳球菌中提取乳酸乳球菌基因组DNA；(3)将所述乳酸乳球菌基因组DNA作为反应模板，用所述PCR引物通过PCR仪扩增，使高拷贝数的β‑葡萄糖苷酶DNA片段与酶切成功的质粒相连，再转入大肠杆菌进行后续的扩增、鉴定，获得阳性质粒；(4)将所述阳性质粒电转到乳酸菌株中，获得高产β‑葡萄糖苷酶的重组乳酸菌；(5)以大豆为原料的产物作为接种原料，接种所述重组乳酸菌，进行发酵，灭菌和灌装，即得富含大豆异黄酮苷元的发酵饮料。2.根据权利要求1所述的一种富含大豆异黄酮苷元的发酵饮料的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，所述PCR引物的正向为：GAAGATCTATGGATGAACTGGCGT；所述PCR引物的反向为：CCATCGATTTATTGCACCTTGG。3.根据权利要求2所述的一种富含大豆异黄酮苷元的发酵饮料的制备方法，其特征在于：所述PCR引物的正向酶切位点为BglII；所述PCR引物的反向酶切位点为ClaI。4.根据权利要求1所述的一种富含大豆异黄酮苷元的发酵饮料的制备方法，其特征在于：步骤(4)中，所述电转条件为：200V，200Ω，电容25μF，时间5ms。5.根据权利要求1所述的一种富含大豆异黄酮苷元的发酵饮料的制备方法，其特征在于：步骤(5)中，所述重组乳酸菌的接种量为2～6％(mg/ml)。6.根据权利要求5所述的一种富含大豆异黄酮苷元的发酵饮料的制备方法，其特征在于：所述重组乳酸菌的接种量为4％(mg/ml)。7.根据权利要求1所述的一种富含大豆异黄酮苷元的发酵饮料的制备方法，其特征在于：步骤(5)中，所述发酵的温度为30℃～40℃，时间为10h～18h。8.根据权利要求7所述的一种富含大豆异黄酮苷元的发酵饮料的制备方法，其特征在于：所述发酵的温度为37℃，时间为12h。9.根据权利要求1所述的一种富含大豆异黄酮苷元的发酵饮料的制备方法，其特征在于：步骤(5)中，所述以大豆为原料的产物作为接种原料具体为：以豆浆或者豆制品制作过程中形成的黄浆水为接种原料。2CN113558193A说明书1/5页一种富含大豆异黄酮苷元的发酵饮料的制备方法技术领域[0001]本发明属于食品技术领域，涉及一种富含大豆异黄酮苷元的发酵饮料的制备方法。背景技术[0002]大豆异黄酮是豆科植物生长过程中形成的双酚次级代谢产物，其由于具有与哺乳动物雌激素内源性雌二醇相似的结构和功能，可以通过与雌激素受体相互作用，起到预防更年期妇女心血管疾病、骨质疏松等作用。除此之外大豆异黄酮还具有抗肿瘤、抗氧化、降低胆固醇等多种生理活性。然而大豆中97％～98％的异黄酮是以结合型糖苷的形式存在，糖苷型大豆异黄酮由于分子量高，亲水性强，因此不能通过小肠壁进入血液被人体有效吸收利用，而是需要经过去糖基化反应后，转化成苷元才能被吸收进入血液。[0003]目前研究发现，乳酸菌在发酵过程中能够产生β‑葡萄糖苷酶，促进糖苷型大豆异黄酮转变为苷元型大豆异黄酮。同时乳酸菌作为人体肠道益生菌，其发酵饮品随着人们饮食习惯向绿色健康饮食转变而越来越受到人们的喜爱。因此若能得到高