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(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN103261407A*(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103261407103261407A(43)申请公布日2013.08.21(21)申请号201180061596.0代理人郑斌田旸(22)申请日2011.12.21(51)Int.Cl.C12N5/0775(2006.01)(30)优先权数据61/459,9872010.12.22USC12Q1/02(2006.01)C12N1/04(2006.01)(85)PCT申请进入国家阶段日2013.06.20(86)PCT申请的申请数据PCT/US2011/0663852011.12.21(87)PCT申请的公布数据WO2012/088225EN2012.06.28(71)申请人杜兰教育基金委员会地址美国路易斯安那州(72)发明人基姆·奥康纳卡蒂·拉塞尔(74)专利代理机构北京集佳知识产权代理有限公司11227权权利要求书4页利要求书4页说明书10页说明书10页附图7页附图7页(54)发明名称用于识别和培养具有高度增殖潜能的多能间充质干细胞的方法(57)摘要干细胞(包括间充质干细胞)的分化和谱系潜能的差异目前限制它们的治疗用途。识别、分离、和特异性扩增具有所需分化潜能的干细胞群的能力将有助于在研究和治疗中使用干细胞。本发明公开通过测定在干细胞上抗原CD146和NG2的差异表达来评估干细胞的分化潜能的方法。探讨了CD146和NG2表达和分化与三系潜能之间的相关性。本发明还公开了特异性扩增或富集具有所需分化潜能的干细胞、监测异质干细胞群的分化潜能、定量在干细胞培养物的分化潜能中异质性、以及由异质细胞培养物中移除具有特异性分化潜能的干细胞的方法。CN103261407ACN1032647ACN103261407A权利要求书1/4页1.一种识别能够高度增殖的多能间充质干细胞的方法,其包括以下步骤:收集间充质干细胞;测定CD146的表达;以及选择具有CD146高表达的所述间充质干细胞。2.根据权利要求1所述的识别能够高度增殖的多能间充质干细胞的方法,其中所选择的具有CD146高表达的间充质干细胞具有大于40%的集落形成效率。3.根据权利要求1所述的识别能够高度增殖的多能间充质干细胞的方法,其包括以下另外的步骤:使得权利要求1中选择的所述间充质干细胞中的所述衰老细胞尽可能少,其如下实现:将衰老细胞的标志物加至所述间充质干细胞;测定指示衰老细胞的所述标志物;以及选择具有CD146高表达和所述衰老细胞之标志物低指示的细胞。4.根据权利要求1所述的识别能够高度增殖的多能间充质干细胞的方法,其包括以下另外的步骤:使得权利要求1中选择的所述间充质干细胞中的谱系定型细胞尽可能少,其如下实现:将谱系定型细胞的标志物加至所述间充质干细胞;测定指示谱系定型细胞的所述标志物;以及选择具有CD146高表达和所述谱系定型细胞之标志物低指示的细胞。5.一种识别能够高度增殖的多能间充质干细胞的方法,收集间充质干细胞;用CD146的底物涂覆膜;将所述间充质干细胞放置在所述膜的一侧;将促进细胞迁移的趋化剂放置在所述膜的另一侧;使所述间充质干细胞迁移通过所述膜;以及收集更快迁移通过所述膜的间充质干细胞。6.一种识别能够高度增殖的多能间充质干细胞的方法,其包括以下步骤:收集间充质干细胞;测定NG2的表达;以及选择具有NG2高表达的所述间充质干细胞。7.根据权利要求6所述的识别能够高度增殖的多能间充质干细胞的方法,其中所选择的具有NG2高表达的间充质干细胞具有大于40%的集落形成效率。8.根据权利要求6所述的识别能够高度增殖的多能间充质干细胞的方法,其包括以下另外的步骤:使得权利要求6中选择的所述间充质干细胞中的所述衰老细胞尽可能少,其如下实现:将衰老细胞的标志物加至所述间充质干细胞;测定指示衰老细胞的所述标志物;以及2CN103261407A权利要求书2/4页选择具有NG2高表达和所述衰老细胞之标志物低指示的细胞。9.根据权利要求6所述的识别能够高度增殖的多能间充质干细胞的方法,其包括以下另外的步骤:使得权利要求6中选择的所述间充质干细胞中的谱系定型细胞尽可能少,其如下实现:将谱系定型细胞的标志物加至所述间充质干细胞;测定指示谱系定型细胞的所述标志物;以及选择具有NG2高表达和所述谱系定型细胞之标志物低指示的细胞。10.一种识别能够高度增殖的多能间充质干细胞的方法,收集间充质干细胞;用NG2的底物涂覆膜;将所述间充质干细胞放置在所述膜的一侧;将促进细胞迁移的趋化剂放置在所述膜的另一侧;使所述间充质干细胞迁移通过所述膜;以及收集更快迁移通过所述膜的间充质干细胞。11.一种识别能够高度增殖的多能间充质干细胞的方法,其包括以下步骤:收集间充质干细胞;测定CD