一种细胞破壁低温提取杜仲绿原酸的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CN104490980A(43)申请公布日(43)申请公布日2015.04.08(21)申请号201310726468.4(22)申请日2013.12.26(71)申请人湖北老龙洞杜仲开发有限公司地址441021湖北省襄樊市襄城区江华路（庞公法庭四楼）湖北老龙洞杜仲开发有限公司(72)发明人田洪全任治军刘冬成(51)Int.Cl.A61K36/46(2006.01)A61P31/04(2006.01)A61P29/00(2006.01)A61K127/00(2006.01)权利要求书1页说明书3页附图1页(54)发明名称一种细胞破壁低温提取杜仲绿原酸的方法(57)摘要本发明涉及一种天然产物提取的方法，尤其是涉及一种采用细胞破壁技术从杜仲叶中提取绿原酸的方法。该方法是将杜仲叶粉碎后，采用弱碱破坏叶片上的角质层，通过低温提取、膜处理、反渗透结合树脂吸附洗脱工艺及低温连续带式干燥而成。本发明采用细胞壁破技术将绿原酸从杜仲叶中释放，绿原酸溶出率高；采用低温提取、低温干燥工艺，减少了热敏性成分绿原酸因受热不稳定热产生的损失，同时降低了能耗；采用膜处理结合树脂进行纯化，杂质去除效果好，绿原酸品质好。CN104490980ACN104490980A权利要求书1/1页1.一种细胞破壁低温提取杜仲绿原酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）提取：第一次：用pH值为9的碱水浸泡（杜仲叶重量的3倍水量）20分钟，然后把碱水放回储罐内作为下一批原料第一次浸泡备用碱水；第二次：加入杜仲叶重量的7倍pH值为2的纯水动态常温提取2小时，放料液；第三次：加入杜仲叶重量的6倍pH值为4的纯水常温动态提取2小时，放料液；第四次：加入杜仲叶重量8倍的纯水，加温到60℃，动态提取1小时，放料液，出液时用板框冷却至30℃以下，本次料液作为下一批原料的第二次提取溶剂；（2）离心：用高速管式离心机离心提取后的料液，去除悬浮杂质，流速不超过1t/h；（3）膜分离：用0.5微米的陶瓷膜分离出杜仲叶中的蛋白质、多糖、鞣质；（4）反渗透浓缩：用反渗透膜回收水，浓缩到杜仲叶原料重量的4倍体积；（5）上树脂柱：树脂型号为NKA-9大孔吸附树脂，上柱流速为柱体积的0.6倍量每小时；（6）洗脱：用柱体积3倍量的50%乙醇洗脱，流速控制在柱体积的0.6倍量每小时，收集洗脱液；（7）回收洗脱液：浓缩回收乙醇，浓缩到相对密度为1.08出液；（8）干燥：连续低温带式干燥、粉碎，温度控制在45℃-60℃。2CN104490980A说明书1/3页一种细胞破壁低温提取杜仲绿原酸的方法技术领域[0001]本发明涉及药材加工领域，具体为一种细胞破壁低温提取、膜分离技术结合树脂工艺制备杜仲绿原酸的方法。背景技术[0002]绿原酸（chlorogenicacid）是一种从双子叶植物（如忍冬叶、咖啡豆、向日葵等）的叶和果实分离得到的酚类，也是许多中草药（如杜仲、金银花、茵陈等）及中药复方制剂抗菌消炎、清热解毒的主要活性成分，目前已成为中草药制剂质量控制的主要指标之一。中草药是中华民族几千年文明的瑰宝，是我们炎黄子孙的骄傲。千百年来，我们的祖先运用中草药及其复方制剂在防病治病方面取得了异常丰富的临床经验，留下了一大批医药名著。近些年，由于西药的泛滥，病原微生物的变异及抗药性也取得了长足的“进步”，于是，人们重新将目光投向了中草药。特别是在人们日益崇尚天然、无污染食品的“后抗生素”时代，中草药以其独到的优势逐渐受到人们前所未有的青睐，中草药中有效成分的提取工艺、作用机理、应用研究也重新成为医药界追逐的热点，并逐渐成为动物营养界研究的一大方向。[0003]绿原酸是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物。它是一种由咖啡酸（caffeicacid）与奎尼酸（鸡纳酸，quinicacid，即1-羟基六氢没食子酸)缩合而成的缩酚酸，异名咖啡鞣酸，化学名3-O-咖啡酰奎尼酸（3-O-caffeoylquinicacid），分子式为C16H18O9，分子量：345.30，半水合物为针状晶体，110℃时变为无水化合物，易溶于水、乙醇、丙酮，微溶于乙酸乙酯，常温下呈淡黄色固体。[0004]植物中绿原酸的生物合成包括了一系列的酶促反应。在酶的催化下,葡萄糖转化成莽草酸（shikimicacid），后者再转化成苯丙氨酸,最后经合成酶作用得绿原酸。其可能的生物合成途径如下：绿原酸在植物中分布广泛,从高等双子叶植物到蕨类植物均有报道，但含量较高的植物不多，主要存在于忍冬科忍冬属（Lonicera）、菊科蒿属（Artemisia）植物中，其中包括杜仲、金银花、向日葵、咖啡。[0005]由于绿原酸是极性较强的有机酸，易溶于醇、水，难