一种从杜仲中提取绿原酸的新方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108084026A(43)申请公布日2018.05.29(21)申请号201711344050.1(22)申请日2017.12.08(71)申请人大兴安岭林格贝寒带生物科技股份有限公司地址165000黑龙江省加格达奇区鑫源小区88号林格贝集团(72)发明人李玉伟姚德坤万莉苏学辉王雷(51)Int.Cl.C07C67/48(2006.01)C07C67/56(2006.01)C07C67/58(2006.01)C07C69/732(2006.01)权利要求书1页说明书3页(54)发明名称一种从杜仲中提取绿原酸的新方法(57)摘要本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从杜仲中提取绿原酸的方法，特别是涉及一种利用酶法提取，高速逆流色谱分离纯化绿原酸的新方法。本发明优点：本发明提取快捷、迅速，所得产品纯度高，环境污染小。1、应用生物酶解技术，使细胞内有效成分充分溶出。2、采用高速逆流色谱技术分离过程简单、溶剂消耗量少，在短时间内实现有效成分的快速分离，且纯度高。本发明利用生物酶法，促使有效成分充分溶出，乙醇回流提取，再采用高速逆流色谱分离纯化，所得绿原酸纯度高。CN108084026ACN108084026A权利要求书1/1页1.一种采用酶法提取并与高速逆流色谱藕联，最终得到高纯度过绿原酸的方法，其步骤如下：(1)酶解：杜仲干燥全草粉碎至40-80目，酶浓度0.3-0.5g/l，酶解温度40-50℃，酶解时间2-3h；(2)回流提取：加入7()-90％乙醇，采用加热回流提取法，料液比1∶10-12，提取温度80-90℃，提取两次，每次提取时间1-1.5h；(3)收集：回收乙醇，薄层层析检测分析，收集绿原酸部分；(4)过滤：过滤，合并两次滤液，得绿原酸粗提物；(5)分相：称取一定克数绿原酸粗提物，选择HSCCC溶剂系统按其比例分别将各种溶剂加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置过夜，分相平衡后分出上相和下相；(6)取适量绿原酸粗提物溶于一定量的下相溶液中，震荡使完全溶解，备用；(7)HSCCC分离：以一定流速将溶剂的上相(固定相)和下相(流动相)以一定比例泵入HSCCC螺旋管，调整转速为1000r/min，以3-5ml/min的流速泵入流动相，紫外检测器检测流出物；(8)收集各色谱组分，将HSCCC分离的到的流分挥干，得含量为90％以上的绿原酸。2.根据权利要求1所述的利用酶法提取并与高速逆流色谱藕联，最终得到高纯度过绿原酸的方法，其特征是：在所述的步骤(1)中，采用的酶为纤维素酶。3.根据权利要求2所述的利用酶法提取并与高速逆流色谱藕联，最终得到高纯度过绿原酸的方法，其特征是：在所述的步骤(5)中，HSCCC溶剂系统为正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水或氯仿-甲醇-水-醋酸或正己烷-醋酸乙酯-正丁醇-甲醇的一种。4.根据权利要求3所述的利用酶法提取并与高速逆流色谱藕联，最终得到高纯度过绿原酸的方法，其特征是：在所述的步骤(6)中，绿原酸粗提物与下相溶液比为1∶10。5.根据权利要求4所述的利用酶法提取并与高速逆流色谱藕联，最终得到高纯度过绿原酸的方法，其特征是：在所述的步骤(7)中，采用10-20ml/min的流速将溶剂的上相和下相泵入HSCCC螺旋管。2CN108084026A说明书1/3页一种从杜仲中提取绿原酸的新方法技术领域：[0001]本发明属于天然有机化学领域，涉及一种绿原酸的纯化方法，特别是涉及一种生物酶解技术，采用乙醇做提取剂，后期采用高速逆流色谱法(HSCCC)分离纯化绿原酸。背景技术：[0002]杜仲(学名EucommiaulmoidesOliver)又名胶木，为杜仲科植物。杜仲为落叶乔木，高可达20米，胸径约50厘米。树皮灰褐色，粗糙，内含橡胶，折断拉开有多数细丝。嫩枝有黄褐色毛，不久变秃净，老枝有明显的皮孔。芽体卵圆形，外面发亮，红褐色，有鳞片6-8片，边缘有微毛。[0003]叶椭圆形、卵形或矩圆形，薄革质，长6-15厘米，宽3.5-6.5厘米。基部圆形或阔楔形，先端渐尖；上面暗绿色，初时有褐色柔毛，不久变秃净，老叶略有皱纹，下面淡绿，初时有褐毛，以后仅在脉上有毛。侧脉6-9对，与网脉在上面下陷，在下面稍突起，边缘有锯齿，叶柄长1-2厘米，上面有槽，被散生长毛。花生于当年枝基部，雄花无花被；花梗长约3毫米，无毛；苞片倒卵状匙形，长6-8毫米，顶端圆形，边缘有睫毛，早落；雄蕊长约1厘米，无毛，花丝长约1毫米，药隔突出，花粉囊细长，无退化雌蕊。雌花单生，苞片倒卵形，花梗长8毫米，子房无毛，1室，扁而长，先端2裂，子房柄极短。翅果扁平，长椭圆形，长3-3.5厘米，宽1-1.3厘米，先端2裂，基部楔形，周围具薄翅。坚果位于中央，稍突起，子房柄长2-3