一种杜仲几丁质酶编码基因（EuCHIT1）及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105734033A(43)申请公布日2016.07.06(21)申请号201610299195.3A01H5/00(2006.01)(22)申请日2016.05.09A01P3/00(2006.01)(66)本国优先权数据201510862054.32015.12.01CN(71)申请人贵州大学地址550025贵州省贵阳市花溪区贵州大学(72)发明人赵德刚董璇郭林霞李岩(74)专利代理机构北京兆君联合知识产权代理事务所(普通合伙)11333代理人胡敬红(51)Int.Cl.C12N9/42(2006.01)C12N15/56(2006.01)权利要求书1页说明书5页C12N15/84(2006.01)序列表3页附图4页(54)发明名称一种杜仲几丁质酶编码基因（EuCHIT1）及其应用(57)摘要本发明提供了一种杜仲几丁质酶编码基因(EuCHIT1)及其应用，属于生物工程技术领域。根据杜仲转录组数据库注释几丁质酶基因部分片段，通过SMARTRACE技术，从杜仲中克隆丁质酶基因如SEQIDNO:1所示，其基因序列和翻译氨基酸如SEQIDNO:2所示。在对几丁质酶基因进行生物信息学分析基础上,遗传转化烟草，通过对烟草总蛋白的提取进行体外抑菌试验发现，其对镰刀菌和灰霉菌有明显的抑制效果。本发明为进一步利用生物工程技术将外源几丁质酶基因转入各种植物中，从而提高植物抗真菌能力，培育抗病品种提供基础。CN105734033ACN105734033A权利要求书1/1页1.杜仲几丁质酶，其氨基酸序列如SEQIDNO：2所示。2.编码权利要求1所述的杜仲几丁质酶的基因。3.权利要求2所述的编码杜仲几丁质酶的基因序列如SEQIDNO：1所示。4.杜仲几丁质酶的表达载体，含有权利要求2或3所述的编码杜仲几丁质酶的基因。5.权利要求4所述的杜仲几丁质酶的表达载体，所述表达载体的骨架载体为pSH-35S，所述的编码杜仲几丁质酶的基因序列如SEQIDNO：1所示。6.杜仲几丁质酶的生产方法，将权利要求2或3所述的编码杜仲几丁质酶的基因转化植物，使其表达杜仲几丁质酶，利用生物反应器生产杜仲几丁质酶，再提取得到。7.根据权利要求6所述的生产方法，所述转化为将权利要求4或5所述的杜仲几丁质酶的表达载体转化根瘤农杆菌LBA4404，遗传转化烟草。8.权利要求2或3编码杜仲几丁质酶的基因在植物基因工程中的应用。9.权利要求8所述应用，为将权编码杜仲几丁质酶的基因转化植物，使植物表达对真菌病害的抗性；或者为将杜仲几丁质酶作为药效成分制成药剂用于防治真菌病害。10.权利要求9所述应用，所述真菌为镰刀菌或灰霉菌。2CN105734033A说明书1/5页一种杜仲几丁质酶编码基因(EuCHIT1)及其应用技术领域[0001]本发明属于植物基因工程技术领域,主要关于杜仲抗真菌几丁质酶(EuCHIT1)及编码基因与应用。背景技术[0002]杜仲(EucommiaulmoidesOliver)是杜仲科杜仲属植物雌雄异株，在我国被利用的历史可以追溯到公元二世纪的《神农本草经》，具有双向调节血压、抑菌和抗菌效用，具有重要的药用价值。鉴于其起源古老，在科学上具有重要的研究价值，目前对杜仲的研究主要集中在血压调节物质，杜仲胶合成途径相关基因的克隆和抗菌物质的化学分离方面。早期研究表明从杜仲中提取的总蛋白对多种植物病源真菌的生长具有明显的抑制作用，并且从中分离到的杜仲抗菌肽EAFP1和EAFP2含有几丁质结合结构。几丁质酶广泛的存在于动植物及微生物的细胞和组织中，以几丁质为底物将其水解成寡聚糖再进一步水解为N－乙酰氨基葡萄糖，高等植物不含作为真菌细胞壁组分之一的几丁质，但当植物受到真菌、细菌和病毒等感染时，植物几丁质酶的转录表达量迅速提高。因此普遍认为几丁质酶是植物重要的病程相关蛋白(pathogenesis-relatedprotein，PR)。目前多种植物的几丁质酶基因序列被克隆，如白杨、蚕豆、小麦、水稻、甜菜、烟草、马铃薯、棉花等，但对杜仲几丁质酶基因的研究尚未见报导发明内容[0003]针对上述领域中的空白，本发明提供一种杜仲几丁质酶，对植物真菌病害的防治有明显的作用。[0004]本发明的目的之一是提供一种杜仲几丁质酶。[0005]本发明另一目的是提供编码上述杜仲几丁质酶的基因序列。[0006]本发明另一目的是提供上述杜仲几丁质酶的编码基因在植物基因工程中的应用。[0007]杜仲几丁质酶(EuCHIT1)，其氨基酸序列如SEQIDNO：2所示。[0008]编码上述杜仲几丁质酶的基因。[0009]所述编码杜仲几丁质酶的基因序列如SEQIDNO：1所示。[0010]杜仲几丁质酶的表达载体，含有编码上述杜仲几丁质