一种抗根肿菌的几丁质酶及编码基因和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN116004584A(43)申请公布日2023.04.25(21)申请号202210984055.5A01H6/20(2018.01)(22)申请日2022.08.17A01N47/44(2006.01)A01P3/00(2006.01)(71)申请人华中农业大学地址430070湖北省武汉市洪山区狮子山街1号(72)发明人陈桃赵艳丽谢甲涛姜道宏付艳苹程家森(74)专利代理机构北京高沃律师事务所11569专利代理师苏士莹(51)Int.Cl.C12N9/42(2006.01)C12N15/56(2006.01)C12N15/70(2006.01)C12N15/84(2006.01)A01H5/00(2018.01)权利要求书1页说明书15页序列表（电子公布）附图5页(54)发明名称一种抗根肿菌的几丁质酶及编码基因和应用(57)摘要本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种抗根肿菌的几丁质酶及编码基因和应用。本所述几丁质酶PbChia1来源于根肿菌，体外表达的PbChia1蛋白可以抑制根肿菌休眠孢子的萌发，延缓根肿菌的发育，缓解油菜根肿病根肿的症状，生防效果为61.29％。超表达PbChia1的转基因植物可以显著降低根肿菌在植物内的定殖率，延缓根肿菌的发育，对根肿病的生防效果高达62.3％。转基因植株对活体营养型病原丁香假单胞菌PstDC3000及死体营养型病原核盘菌和立枯丝核菌均显示抗病能力。表明根肿菌几丁质酶PbChia1可为根肿病的绿色防控提供新基因资源。CN116004584ACN116004584A权利要求书1/1页1.一种抗根肿菌的几丁质酶，其特征在于，所述几丁质酶的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.一种编码权利要求1所述几丁质酶的基因。3.根据权利要求2所述基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。4.一种体外表达权利要求1所述几丁质酶的原核表达载体。5.根据权利要求4所述原核表达载体，其特征在于，所述原核表达载体的基础载体包括pGEX‑6p‑1和/或pET‑28a。6.权利要求1所述几丁质酶在提高作物根肿病抗性中的应用。7.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述几丁质酶的来源包括自体表达和/或体外表达。8.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述根肿病抗性包括抑制休眠根肿菌孢子萌发、延缓根肿菌的发育和/或缓解根肿病根肿症状。9.一种通过创制超表达权利要求2所述基因的转基因株系在获取抗根肿病材料中的应用。10.根据权利要求9所述应用，其特征在于，抗根肿病材料的性状包括：显著降低根肿菌在植物内的定殖率和/或延缓根肿菌的发育。2CN116004584A说明书1/15页一种抗根肿菌的几丁质酶及编码基因和应用技术领域[0001]本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种抗根肿菌的几丁质酶及编码基因和应用。背景技术[0002]十字花科根肿病是世界范围的重要植物病害，该病害由原生动物根肿菌(Plasmodiophorabrassicae)引起，主要危害植物根部。根肿菌不仅侵染油菜，而且还侵染十字花科蔬菜，如白菜、花菜、萝卜、包菜、西兰花等。根肿病是典型的土传病害，防治困难，一旦有根肿病危害的地块基本很难清除，因此迫切需要高效的根肿病绿色防控技术。[0003]几丁质是n‑乙酰葡糖胺通过β连接聚合而成的结构同多糖，主要存在于昆虫和甲壳类动物的外骨骼，真菌和硅藻的细胞壁中，有的原生动物中也含有几丁质。而植物和高等动物中不含有几丁质，几丁质代谢过程中的合成酶和水解酶都可以设计为绿色药剂的理想分子靶标，但是目前对于根肿菌中几丁质酶的代谢途径研究并不深入，需要开发新的功能基因。发明内容[0004]本发明的目的在于提供一种抗根肿菌的几丁质酶及编码基因和应用，无论是自体来源的几丁质酶还是外源的几丁质酶都使得植物对于根肿菌的抗性增强，为根肿病的绿色防控提供新基因资源。[0005]本发明提供了一种抗根肿菌的几丁质酶，所述几丁质酶的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。[0006]本发明还提供了一种编码上述几丁质酶的基因。[0007]优选的，所述基因的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。[0008]本发明还提供了一种体外表达上述几丁质酶的原核表达载体。[0009]优选的，所述原核表达载体的基础载体包括pGEX‑6p‑1和/或pET‑28a。[0010]本发明还提供了上述几丁质酶在提高作物根肿病抗性中的应用。[0011]优选的，所述几丁质酶的来源包括自体表达和/或体外表达。[0012]优选的，所述根肿病抗性包括抑制休眠根肿菌孢子萌发、延缓根肿菌的发育和/或缓解根肿病根肿症状。[0013]本发明还提供了一种通过创制超表达上述基因的转基因株系在获取抗根肿病材料中