一种杜仲抗烟草白粉病的几丁质酶(EuCHIT2)及编码基因与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105925552A(43)申请公布日2016.09.07(21)申请号201610532888.2(22)申请日2016.07.08(71)申请人贵州大学地址550025贵州省贵阳市花溪区贵州大学(72)发明人赵德刚董璇李岩郭林霞冉新丁延庆(74)专利代理机构北京兆君联合知识产权代理事务所(普通合伙)11333代理人胡敬红(51)Int.Cl.C12N9/42(2006.01)C12N15/56(2006.01)C12N15/84(2006.01)A01H5/00(2006.01)权利要求书1页说明书8页序列表3页附图5页(54)发明名称一种杜仲抗烟草白粉病的几丁质酶(EuCHIT2)及编码基因与应用(57)摘要本发明涉及一种杜仲抗烟草白粉病的几丁质酶(EuCHIT2)及编码基因与应用，属于生物技术领域。杜仲几丁质酶(EuCHIT2)，其氨基酸序列如SEQIDNO：2所示。所述编码杜仲几丁质酶的基因，其序列如SEQIDNO：1所示。本发明从杜仲中克隆了一个几丁质酶基因，通过遗传转化该基因能够提高烟草对烟草白粉病的抗性，同时提高了植物防御相关基因的表达、保护性酶酶活、降低逆境对细胞膜的伤害、提高植物游离脯氨酸的含量，从而增强植物的抗病能力。CN105925552ACN105925552A权利要求书1/1页1.杜仲几丁质酶(EuCHIT2)，其氨基酸序列如SEQIDNO：2所示。2.编码权利要求1所述的杜仲几丁质酶(EuCHIT2)的基因。3.根据权利要求2所述的基因，其核苷酸序列如SEQIDNO：1所示。4.一种表达载体，含有权利要求1或2所示的基因。5.根据权利要求4所述的表达载体，其骨架载体为pSH-35S。6.杜仲几丁质酶(EuCHIT2)在植物基因工程中的应用。7.根据权利要求6所述的应用，为将权利要求1或2所述的基因转化植物，使植物增强植物的抗病能力；或者为将权利要求1所述的杜仲几丁质酶(EuCHIT2)作为药效成分制成药剂用于增强植物的抗病能力。8.根据权利要求7所述的应用，为将权利要求4或5所述的表达载体转化根瘤农杆菌LBA4404，遗传转化烟草，使其增强抗病能力。9.根据权利要求8所述的应用，所述抗病能力为抗真菌感染的能力。10.根据权利要求9所述的应用，所述真菌为白粉病。2CN105925552A说明书1/8页一种杜仲抗烟草白粉病的几丁质酶(EuCHIT2)及编码基因与应用技术领域[0001]本发明属于基因工程技术领域,尤其关于杜仲抗烟草白粉病几丁质酶(EuCHIT2)及编码基因与应用。背景技术[0002]杜仲(EucommiaulmoidesOliver)是中国传统中草药，其明显的抗菌作用在长期临床运用中得到了很好的验证。化学分离提取的杜仲总蛋白物对多种植物病原真菌和细菌的生长具有明显的抑制作用，从中纯化获得的EAFP1，EAFP2，并对马铃薯疫病菌(P.infestans)、串珠镰刀菌(F.moniliforme)、棉花炭疽病菌(C.gossypii)和番茄枯萎病菌(A.lycopersici)的生长抑制作用，对这两个蛋白的结构分析发现他们具有几丁质结合结构。几丁质酶广泛的存在于动植物和微生物的组织和细胞中，它能以真菌细胞壁的重要组成成分——几丁质为底物，将其水解成为N－乙酰氨基葡萄糖，当植物受到生物和非生物因素胁迫时，植物几丁质酶的转录表达量会迅速提高。因此普遍认为几丁质酶是植物重要的病程相关蛋白(Pathogenesis-relatedprotein，PR)。全球每年由于烟草白粉病害在田间所造成的损失介于30％-80％不等，贵州省是中国的烟草种植大省，气候湿润白粉病害严重，每年烟草白粉病害给本省的烟草产业造成巨大损失。目前对烟草白粉病的防治方式主要以化学防治方式为主，但使用遗传转化杜仲几丁质酶基因以提高烟草对烟草白粉病的抗性的研究未见报导。发明内容[0003]针对上述领域中的空白，本发明提供一种杜仲几丁质酶(EuCHIT2)，对烟草白粉病的防治有明显的作用。[0004]本发明的目的之一是提供一种杜仲几丁质酶。[0005]本发明另一目的是提供编码上述杜仲几丁质酶的基因序列。[0006]本发明另一目的是提供上述杜仲几丁质酶的编码基因在植物基因工程中的应用。[0007]杜仲几丁质酶(EuCHIT2)，其氨基酸序列如SEQIDNO：2所示。[0008]所述编码杜仲几丁质酶的基因。[0009]所述基因序列如SEQIDNO：1所示。[0010]杜仲几丁质酶的表达载体，含有编码上述杜仲几丁质酶的基因。[0011]所述表达载体的骨架载体为pSH-35S。[0012]杜仲几丁质酶的编码基因在植物基因工程中的应用。[0013]所述应用为将编码杜