一种杜鹃兰再生植株的快速培育方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109105264A(43)申请公布日2019.01.01(21)申请号201811301934.3(22)申请日2018.11.02(71)申请人成都大学地址610106四川省成都市外东十陵镇申请人天全县同创重楼种植农民专业合作社(72)发明人王跃华陈燕黄鹏陈芳马涛曾宇刘欢吉礼涛唐亚铃何新友张霞杜媛唐捷王宗兵(74)专利代理机构成都科奥专利事务所(普通合伙)51101代理人余丽生(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书1页说明书5页(54)发明名称一种杜鹃兰再生植株的快速培育方法(57)摘要本发明公开了一种杜鹃兰再生植株的快速培育方法，包括步骤：(1)杜鹃兰球茎的培养；(2)外植体的选取；(3)不定芽的诱导；(4)无根苗的生根培养；(5)炼苗。本发明以杜鹃兰芽体基部的球茎作为外植体，通过不定芽的诱导、无根苗的生根培养和炼苗，大大缩短了培养杜鹃兰再生植株的时间，为杜鹃兰再生植株的大规模繁殖提供了一种新途径，有效地解决了当前杜鹃兰植物资源和种苗资源短缺的问题。CN109105264ACN109105264A权利要求书1/1页1.一种杜鹃兰再生植株的快速培育方法，其特征在于包括如下步骤：(1)杜鹃兰球茎的培养a.从已成熟的杜鹃兰果实中选取种子，将种子消毒处理后接入White+活性炭0.5～1.0g/L+腺嘌呤5～8mg/L+蔗糖25～30g/L液体培养基中，在温度15～22℃、无光照条件下诱导培养25～40天；b.将诱导培养30天后的种子转接入1/2MS+6BA1～3mg/L+TDZ0.3～0.6mg/L+NAA0.1～0.5mg/L+活性炭1.0～2.0g/L培养基中，在温度为22～26℃、每天光照15～24小时和光照强度为2000～3000lx的条件下培养40～60天，获得基部生长有球茎的杜鹃兰芽体；(2)外植体的选取：选取杜鹃兰芽体基部直径为0.5～1.0cm的球茎作为外植体；(3)不定芽的诱导将球茎外植体沿纵向对半切开，以伤口面平放在培养基表面的方式接入MS+6-BA0.1～0.5mg/L+2ip4～8mg/L+2,4-D0.3～2.0mg/L+土豆泥25～50g/L+芋头泥20～50g/L+半胱氨酸2.0～5.0g/L+活性炭1.0～3.0g/L固体培养基中，先在温度为18～22℃和无光照条件下培养10～15天，再置于温度为22～26℃、每天光照15～24小时、光照强度为2000～3000lx的条件下诱导培养不定芽；(4)无根苗的生根培养选取步骤(3)中生长2cm以上、且基部膨大并形成有环节的不定芽作为无根苗，将无根苗接入1/2MS+NAA0.1～0.5mg/L+活性炭3.0～5.0g/L生根培养基中，在温度18～20℃、每天光照8～12小时和光照强度为1000～1500lx的条件下进行生根培养；(5)炼苗选取在步骤(4)中生长状况良好的杜鹃兰再生植株，先打开培养瓶盖培养1～3d，再从培养瓶中取出，移栽至已消毒的基质中栽培；上述所有培养基的蔗糖20～40.0g/L、琼脂5.5～7.5g/L，液体培养基除外。2.根据权利要求1所述的杜鹃兰再生植株的快速培育方法，其特征在于：步骤(1)a中所述消毒处理是指先将杜鹃兰种子放入浓度为2.0～6.0％的次氯酸钙溶液中浸泡20～40min，再放入浓度为5.0～10.0％的过氧化氢溶液消毒3～6min，最后用无菌水洗涤2～5次。3.根据权利要求1所述的杜鹃兰再生植株的快速培育方法，其特征在于：步骤(5)中所述基质由草碳、蛭石、珍珠岩和沙按照2:1:1:1的比例混合制成。2CN109105264A说明书1/5页一种杜鹃兰再生植株的快速培育方法技术领域[0001]本发明涉及一种杜鹃兰再生植株的快速培育方法，具体涉及一种以杜鹃兰球茎为外植体的杜鹃兰再生植株的快速培育方法。背景技术[0002]杜鹃兰[Cremastraappendiculata(D.Don.)Makion]又名毛慈菇、算盘七，为兰科杜鹃兰属的野生珍稀药用及观赏植物，主要分布于东亚地区，尤以中国的贵州、四川为多。以假鳞茎入药，味辛、甘，性寒，有小毒。有清热解毒、润肺止咳、活血止痛、消肿散结等功效，内用可抗肝癌、乳腺癌、子宫癌等，外用治疮毒、蛇虫咬伤、皮肤烫伤或烧伤等。杜鹃兰不仅是珍稀药用植物，而且是我国三级珍稀濒危野生保护植物。[0003]杜鹃兰自然贮存量极少，加之无计划的人为采挖，野生资源濒临枯竭。杜鹃兰喜冷凉阴湿环境，对生态环境要求较严，目前主要依靠分株繁殖，其繁殖系数极低。另外，因杜鹃兰植物种子非常细小且无胚乳，所以在自然环境下其种子繁殖成功率极低。然而药材市场对杜鹃兰的需求量非常大，致使人们进行地毯式的采挖，野生资源濒