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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109618932A(43)申请公布日2019.04.16(21)申请号201910027305.4(22)申请日2019.01.11(71)申请人东北林业大学地址150040黑龙江省哈尔滨市香坊区和兴路26号(72)发明人李淑娟张含国董实伟董昊白晓明杨宇宁史瀛(74)专利代理机构哈尔滨市松花江专利商标事务所23109代理人岳泉清(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书2页说明书6页附图2页(54)发明名称一种兴安杜鹃不定芽诱导及植株再生的方法(57)摘要一种兴安杜鹃不定芽诱导及植株再生的方法,涉及植物组织培养领域,尤其涉及一种不定芽诱导及植株再生的方法。是要解决现有兴安杜鹃组织培养器官发生困难,用时较长的问题。方法:一、材料的采集及处理;二、不定芽分化诱导及增殖;三、不定芽伸长诱导;四、不定芽生根培养;五、炼苗和移栽。本发明以兴安杜鹃野生植株水培嫩芽做外植体,不定芽诱导率高达100%,丛生苗生根率达到99%,移栽成活率高达100%,从外植体培养至成苗仅用90d左右时间,从第二批开始,直接从增殖分化开始培养,至成苗仅需要60d。本发明用于植物组织培养领域。CN109618932ACN109618932A权利要求书1/2页1.一种兴安杜鹃不定芽诱导及植株再生的方法,其特征在于该方法包括以下步骤:一、材料的采集及处理:选择生长健壮、无病虫害的野生兴安杜鹃植株,剪取40~50cm长的枝条,进行水培处理,待嫩茎长至3~5cm时剪下,用自来水冲洗1~2h,在无菌操作台内进行消毒处理;二、不定芽分化诱导及增殖:将步骤一消毒处理后的材料接种到不定芽诱导培养基WPM1中培养,培养条件为:温度23~25℃,每日光照12~16h,光照强度30~40μmol·m-2·s-1;培养15~20d即可诱导出不定芽;然后继续放置在培养基WPM1中培养,进行不定芽增殖;三、不定芽伸长诱导:将带有不定芽的愈伤组织切成块放入不定芽伸长培养基WPM2中,在温度为23~25℃,每日光照12~16h,光照强度30~40μmol·m-2·s-1的条件下培养15~20d;四、丛生芽生根培养:将茎长超过1-2cm的成簇丛生芽接种于生根培养基WPM3中,在温度为23~25℃,每日光照12~16h,光照强度30~40μmol·m-2·s-1的条件下培养20~25d生根;五、炼苗和移栽:将根长超过2cm的丛生植株经炼苗2~3d后移栽到温室培养。2.根据权利要求1所述的一种兴安杜鹃不定芽诱导及植株再生的方法,其特征在于步骤一中所述消毒处理的具体方法是:将自来水冲洗过的嫩茎用无菌水清洗1遍,再将茎段放入体积百分浓度为70%的酒精中消毒10sec,取出茎段用无菌水清洗3遍,然后用体积浓度为3%的次氯酸钠消毒40sec,再次用无菌水清洗3遍,最后用无菌滤纸吸干嫩茎表面的水分,用无菌剪刀将嫩茎形态学下端已被消毒液氧化的部分剪掉,即完成。3.根据权利要求1或2所述的一种兴安杜鹃不定芽诱导及植株再生的方法,其特征在于步骤二中所述不定芽诱导培养基WPM1由400mg/LNH4NO3、370mg/LMgSO4·7H2O、990mg/LK2SO4、170mg/LKH2PO4、96mg/LCaCl2·2H2O、27.8mg/LFeSO4·7H2O、37.3mg/LNa2EDTA、8.6mg/LZnSO4·7H2O、0.25mg/LCuSO4·5H2O、22.4mg/LMnSO4·4H2O、6.2mg/LH3BO3、0.25mg/LNaMoO2·2H2O、1.0mg/L盐酸硫胺素、0.5mg/L盐酸吡哆醇、0.5mg/L烟酸、2.0mg/L甘氨酸、100mg/L肌醇、25g/L蔗糖、6.5g/L琼脂、0.01~1.0mg/L吲哚丁酸、0.01~1.0mg/L噻苯隆和蒸馏水制成,pH值为5.5。4.根据权利要求3所述的一种兴安杜鹃不定芽诱导及植株再生的方法,其特征在于步骤三中不定芽伸长培养基WPM2由400mg/LNH4NO3、370mg/LMgSO4·7H2O、990mg/LK2SO4、170mg/LKH2PO4、96mg/LCaCl2·2H2O、27.8mg/LFeSO4·7H2O、37.3mg/LNa2EDTA、8.6mg/LZnSO4·7H2O、0.25mg/LCuSO4·5H2O、22.4mg/LMnSO4·4H2O、6.2mg/LH3BO3、0.25mg/LNaMoO2·2H2O、1.0mg/L盐酸硫胺素、0.5mg/L盐酸吡哆醇、0.5mg/L烟酸、2.0mg/L甘氨酸、100mg/L肌醇、25g/L蔗糖、6.5g/L琼脂、0.01~1.0mg/L吲哚丁酸、0.0001~0.1mg/L噻苯