一种利用微生物发酵法提取杜仲叶多糖的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113564212A(43)申请公布日2021.10.29(21)申请号202110844948.5(22)申请日2021.07.26(83)生物保藏信息GDMCCNo:617282021.06.21(71)申请人浙江树人学院（浙江树人大学）地址310015浙江省杭州市拱墅区树人街8号浙江树人学院(72)发明人陈虹张建芬雷超柯薇陆胤(74)专利代理机构杭州天正专利事务所有限公司33201代理人黄美娟李世玉(51)Int.Cl.C12P19/04(2006.01)C12P1/02(2006.01)权利要求书1页说明书7页C12R1/80(2006.01)序列表1页附图1页(54)发明名称一种利用微生物发酵法提取杜仲叶多糖的方法(57)摘要本发明公开了一种利用微生物发酵法提取杜仲叶多糖的方法，杜仲叶粉中加入无菌蔗糖水溶液，接种毡毛青霉(Penicilliumvelutinum)DZ‑9‑67孢子，于28–30℃发酵2–3d，发酵物加去离子水25‑30℃浸提，然后超声波辅助浸提后，浓缩至原体积的1/10–1/7.5，获得浓缩物；浓缩物加入乙醇水溶液在4℃沉淀，离心，沉淀物真空干燥，获得杜仲叶多糖粗提物；在杜仲叶多糖超声水提前，增加了毡毛青霉DZ‑9‑67的发酵预处理，较不采用发酵预处理的超声水提法相比，杜仲叶多糖的提取得率可以提高33.7％。CN113564212ACN113564212A权利要求书1/1页1.一种利用微生物发酵法提取杜仲叶多糖的方法，其特征在于所述方法为：杜仲叶粉中加入无菌蔗糖水溶液，接种毡毛青霉(Penicilliumvelutinum)DZ‑9‑67孢子，于28–30℃发酵2–3d，发酵物加去离子水25‑30℃浸提，然后超声辅助浸提后，浓缩至原体积的1/10–1/7.5，获得浓缩物；浓缩物加入乙醇水溶液在4℃醇沉，离心，沉淀真空干燥，获得杜仲叶多糖粗提物；所述毡毛青霉(Penicilliumvelutinum)DZ‑9‑67保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCCNo:61728，保藏日期2021年6月21日，地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼；邮编510070。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的无菌蔗糖水溶液浓度是3–5g/L，无菌蔗糖水溶液体积用量以杜仲叶粉重量计为1.0–1.5mL/g，所述桔青霉DZ‑9‑67孢子接种量以杜仲叶粉重量计为5×107–7×107个/g。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述杜仲叶粉是将成熟的绿色杜仲叶烘干粉碎后过20目筛获得。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述加去离子水室温浸提时间为4–6h，所述去离子水体积加入量以发酵前杜仲叶粉重量计为15–20mL/g。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述超声辅助浸提是在80–90℃的超声波清洗机中，200–300W超声提取1–2h。6.如权利要求1所述的方法，其特征在于乙醇水溶液体积浓度为95％，所述乙醇水溶液体积用量为浓缩物体积的4–5倍。7.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述毡毛青霉DZ‑9‑67孢子以孢子液的形式加入，所述孢子液的制备方法为：低温保藏的毡毛青霉DZ‑9‑67接种于PDA平板培养基，于28–30℃恒温培养1.5–2d后，加入无菌生理盐水于培养皿中，用接种环搅动使孢子悬浮，获得孢子液；所述PDA平板培养基终浓度组成为：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂20g/L，溶剂为自来水，pH自然。8.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述浓缩物的制备方法为：发酵物加入去离子水，搅拌均匀后，先置于30℃水浴中保温4–6h，之后转入水温80–90℃的超声波清洗机中，200–300W超声提取1–2h；超声水提结束后，趁热过滤，将滤液55℃减压浓缩至原体积的1/8–1/12，获得浓缩物；所述去离子水体积加入量以发酵前杜仲叶粉重量计为15–20mL/g。9.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述杜仲叶多糖粗提物的制备方法为：向浓缩物中加入4–5倍体积的95％乙醇水溶液，4℃条件下静置8–12h后，室温条件下8000r/min离心5–10min，收集多糖沉淀，于60℃真空干燥至恒重，得杜仲叶多糖粗提物。2CN113564212A说明书1/7页一种利用微生物发酵法提取杜仲叶多糖的方法(一)技术领域[0001]本发明属于生物化工技术领域，具体涉及一种微生物发酵技术在杜仲叶多糖提取中的应用。(二)背景技术[0002]杜仲(EucommiaulmoidesOliv.)，又名胶木，为杜仲科杜仲属植物。杜仲在我国栽培已有两千多年的历史。我国第一部药书汉代的《神农本草经》就记载了杜仲树皮的药效，并将杜仲列为上