一种利用微生物发酵法提取桑叶多糖的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112481134A(43)申请公布日2021.03.12(21)申请号202011347949.0C08B37/00(2006.01)(22)申请日2020.11.26C12R1/785(2006.01)(83)生物保藏信息GDMCCNo:612722020.11.05(71)申请人浙江工业大学地址310014浙江省杭州市下城区潮王路18号(72)发明人梅建凤季军情庄仕航易喻王旭东应国清(74)专利代理机构杭州天正专利事务所有限公司33201代理人黄美娟李世玉(51)Int.Cl.C12N1/14(2006.01)权利要求书1页说明书6页C12P19/04(2006.01)序列表1页附图1页(54)发明名称一种利用微生物发酵法提取桑叶多糖的方法(57)摘要本发明公开了一种利用微生物发酵法提取桑叶多糖的方法，所述方法为：桑叶粉中加入无菌生理盐水，接种总状毛霉(Mucorracemosus)SY5‑47的孢子，于28–30℃发酵3–4d，发酵物经超声水提后浓缩，获得浓缩物；浓缩物经醇沉和真空干燥后，获得桑叶粗多糖；在桑叶多糖超声水提前，增加了总状毛霉SY5‑47的发酵预处理。总状毛霉SY5‑47在桑叶粉中适度生长，产生多种多糖水解酶，对桑叶细胞壁的水解，使得桑叶结构组织疏松，促进结合态可溶性多糖的解离，在热水超声浸提时更容易溶出。较不采用发酵预处理的超声水提法相比，桑叶多糖的提取收率可以提高35％以上。CN112481134ACN112481134A权利要求书1/1页1.一种利用微生物发酵法提取桑叶多糖的方法，其特征在于所述方法为：向桑叶粉中加入无菌生理盐水，接种总状毛霉(Mucorracemosus)SY5‑47的孢子，于28–30℃发酵3–4d，发酵物经超声水提后浓缩，获得浓缩物；浓缩物经醇沉和真空干燥后，获得桑叶粗多糖；所述总状毛霉SY5‑4，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCCNo:61272，保藏日期2020年11月5日，地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼；邮编510070。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述无菌生理盐水体积用量以桑叶粉重量计为2.5–3.0mL/g；所述总状毛霉SY5‑47孢子接种量以桑叶粉重量计为3–5×107个/g。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述桑叶粉是将成熟的绿色桑叶烘干粉碎后过40目筛获得。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述总状毛霉SY5‑47以孢子液的形式加入，所述孢子液的制备方法为：低温保藏的总状毛霉SY5‑47接种于PDA平板培养基，于28–30℃恒温培养2–3d后，加入无菌生理盐水于培养皿中，用接种环搅动使孢子悬浮，获得孢子液。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述浓缩物的制备方法为：发酵物加入去离子水，搅拌均匀后，先置于30℃水浴中保温4–6h，然后转入水温70‑85℃的超声波清洗机中，100–200W超声提取2–3h；超声水提结束后，趁热过滤，将滤液55℃减压浓缩至原体积的1/4–1/5，获得浓缩物。6.如权利要求5所述的方法，其特征在于所述去离子水体积加入量以发酵前桑叶粉重量计为20–30mL/g。7.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述桑叶多糖的制备方法为：向浓缩物中加入4–5倍体积的95％乙醇，室温静置8–12h后，室温条件下8000r/min离心5–10min，收集多糖沉淀，于60℃真空干燥至恒重，得桑叶粗多糖。2CN112481134A说明书1/6页一种利用微生物发酵法提取桑叶多糖的方法(一)技术领域[0001]本发明属于生物化工技术领域，具体涉及一种微生物发酵技术在桑叶多糖提取中的应用。(二)背景技术[0002]桑叶为桑科植物桑(MorusalbaL.)的叶子，是《中国药典》收录的传统中药材，具有疏散风热，清肺润燥，清肝明目的功能，主治风热感冒，肺热燥咳，头晕头痛，目赤昏花。现代药理学研究表明桑叶具有抗凝、降血压、降血糖、降血脂、抗衰老、抗肿瘤等药理作用。桑叶的化学成分有多糖、黄酮、生物碱、维生素、胡萝卜素和许多人体所需的氨基酸，其中多糖是主要有效成分之一。[0003]现代医学研究表明，桑叶多糖具有降血脂、抗血栓、降血糖、降血压、抗衰老、抗炎和提高免疫力等功能。作为一种植物性功能多糖，桑叶多糖在医疗和保健方面的应用前景广阔。我国桑叶资源丰富，而传统的养蚕业在逐渐萎缩，所以开发桑叶多糖产品有着较高的社会和经济价值。[0004]目前，常见的桑叶多糖提取方法主要有热水浸提法、超声或微波辅助提取法和酶辅助提取法等。不同的提取工艺有各自的优缺点，多糖的提取收率也差异较大。热水浸提法的耗时长且多糖提取率低；超声或微波辅助提取法是在热水浸提的