用于梅花鹿茸真伪鉴别的引物及探针、试剂盒和方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN101974524A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN101974524A(43)申请公布日2011.02.16(21)申请号201010555571.3(22)申请日2010.11.23(71)申请人中国检验检疫科学研究院地址100123北京市朝阳区高碑店北路甲3号(72)发明人陈颖韩建勋邓婷婷林凤俊黄文胜吴亚君(74)专利代理机构隆天国际知识产权代理有限公司72003代理人吴小瑛吕俊清(51)Int.Cl.C12N15/11(2006.01)C12Q1/68(2006.01)G01N21/64(2006.01)权利要求书1页说明书9页序列表2页附图3页(54)发明名称用于梅花鹿茸真伪鉴别的引物及探针、试剂盒和方法(57)摘要本发明涉及用于梅花鹿茸真伪鉴别的特异性寡核苷酸引物及探针。本发明还涉及用于梅花鹿茸真伪鉴别的实时荧光PCR检测方法，所述方法包括使用本发明的特异性寡核苷酸引物及探针。本发明还涉及用于梅花鹿茸真伪鉴别的PCR检测试剂盒，所述试剂盒包括本发明的特异性寡核苷酸引物和探针。本发明还涉及本发明的特异性寡核苷酸引物及探针在鉴别梅花鹿茸真伪中的应用。本发明的PCR检测方法，能够简单、快速、特异且灵敏地鉴别梅花鹿茸的真伪。CN1097452ACCNN110197452401974528A权利要求书1/1页1.核酸，其碱基序列如SEQIDNo.7所示。2.用于实时荧光PCR方法鉴别梅花鹿茸真伪的特异性寡核苷酸引物对及探针，所述引物对和探针基于权利要求1所述的核酸设计，其中所述引物对由上游引物和下游引物组成，所述上游引物的碱基序列为SEQIDNo.1，所述下游引物的碱基序列为SEQIDNo.2，所述探针的碱基序列为SEQIDNo.3，在探针的3’端连接有一个荧光淬灭基团BHQ1，5’端连接有一个荧光报告基团FAM。3.用于实时荧光PCR方法鉴别梅花鹿茸真伪的试剂盒，所述试剂盒包括根据权利要求2所述的特异性寡核苷酸引物对及探针。4.根据权利要求3所述的试剂盒，所述试剂盒进一步包含另外的通用引物对和探针，所述另外的通用引物对由碱基序列为SEQIDNo.4的上游引物和碱基序列为SEQIDNo.5的下游引物组成，所述探针的碱基序列为SEQIDNo.6，在探针的3’端连接有一个荧光淬灭基团BHQ2，5’端连接有一个荧光报告基团TAMRA。5.梅花鹿茸真伪鉴别的实时荧光PCR检测方法，所述方法包括使用权利要求2所述的特异性寡核苷酸引物对及探针或权利要求3所述的试剂盒。6.根据权利要求5所述的实时荧光PCR检测方法，还进一步包括提取鹿茸样品总DNA的步骤。7.根据权利要求6所述的实时荧光PCR检测方法，通过使用通用引物对及探针检测样品DNA的提取质量，所述通用引物由碱基序列为SEQIDNo.4的上游引物和碱基序列为SEQIDNo.5的下游引物组成，所述探针的碱基序列为SEQIDNo.6，在探针的3’端连接有一个荧光淬灭基团BHQ2，5’端连接有一个荧光报告基团TAMRA。8.根据权利要求1所述的核酸在鉴别梅花鹿茸真伪中的应用。9.权利要求2所述的特异性寡核苷酸引物对及探针在鉴别梅花鹿茸真伪中的应用。10.权利要求3或4所述的试剂盒在鉴别梅花鹿茸真伪中的应用。2CCNN110197452401974528A说明书1/9页用于梅花鹿茸真伪鉴别的引物及探针、试剂盒和方法技术领域[0001]本发明属于生物技术领域，具体而言，本发明涉及用于梅花鹿茸真伪鉴别的特异性寡核苷酸引物及探针，包含本发明的特异性寡核苷酸引物及探针的试剂盒，用于鉴别梅花鹿茸真伪的实时荧光PCR检测方法，以及所述特异性寡核苷酸引物和探针或试剂盒在鉴别梅花鹿茸真伪中的应用。背景技术[0002]鹿茸(CornuCerviPantotrichum)是鹿科动物梅花鹿(CervusnipponTemminck)或马鹿(CervuselaphusLinnaeus)雄鹿未骨化密生茸毛的幼角，习称花鹿茸、马鹿茸。鹿茸分锯茸(不具头骨的鹿茸)、砍茸(带头骨的鹿茸)和鹿茸片(鹿茸切制加工后而成的薄片)。鹿茸具有壮肾阳、益精血、强筋骨等功效，为名贵药材。[0003]鹿的种类甚多，但有药用价值的主要指梅花鹿和马鹿，且认为梅花鹿茸较马鹿茸质优。目前我国仅有部分地区有少量野生梅花鹿，为保护资源，已将梅花鹿列为国家一级保护动物，马鹿列为国家二级保护动物，而药用鹿茸现主要取自人工饲养之鹿。梅花鹿茸主产于吉林、辽宁、河北等地，马鹿茸主产于黑龙江、吉林、内蒙古等地。[0004]梅花鹿茸作为一种高级营养品，自古以来价格就比较昂贵。随着生活水平的提高，人们对鹿茸的消费量也在不断攀升。由于鹿茸的价格受到鹿茸的品种、产地等诸多因素的影响，一些不法厂商通过以假充真、以次充