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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号(10)授权公告号CNCN102830229102830229B(45)授权公告日2014.12.17(21)申请号201210307485.Xcolloidalgold-immunochromatographyassaytodetectimmunoglobulinGantibodiesto(22)申请日2012.08.27TreponemapallidumwithTPN17andTPN47.(73)专利权人北京新兴四寰生物技术有限公司《DiagnosticMicrobiologyandInfectious地址100000北京市大兴区大兴经济开发区Disease》.2010,第68卷193-200.科苑路18号曾志良等.一期梅毒患者梅毒螺旋体和血清(72)发明人吕传臣周逸学检测.《中国皮肤性病学杂志》.2002,第16卷(74)专利代理机构北京风雅颂专利代理有限公(第2期),107-108.司11403徐长根等.胶体金免疫层析法快速筛查献血代理人李翔田欣欣者梅毒螺旋体抗体.《临床输血与检验》.2009,第11卷(第3期),234-235.(51)Int.Cl.Li-RongLinetal.EvaluationofaG01N33/577(2006.01)colloidalgoldimmunochromatographyassay(56)对比文件inthedetectionofTreponemapallidumCN202372508U,2012.08.08,权利要求1.specificIgMantibodyinsyphilisserofastWO02/33414A1,2002.04.25,全文.reactionpatients:aserologicmarkerforWO2007/002178A2,2007.01.04,全文.therelapseandinfectionofsyphilis.WO2007/061793A2,2007.05.31,全文.《DiagnosticMicrobiologyandInfectiousCN101825634A,2010.09.08,全文.Disease》.2011,第70卷10-16.CN101858916A,2010.10.13,全文.审查员李宏悦CN101858914A,2010.10.13,全文.Li-RongLinetal.Developmentofa权权利要求书1页利要求书1页说明书4页说明书4页附图1页附图1页(54)发明名称响,准确可靠。梅毒螺旋体IgM抗体胶体金法检测试剂及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种梅毒螺旋体IgM抗体胶体金法检测试剂及其制备方法,该试剂包括金结合物垫(3)、硝酸纤维素反应膜(4)、样品垫(2)、吸水纸(5)和PVC背衬(1);将样品垫、金结合物垫、硝酸纤维素反应膜和吸水纸顺次相互叠压粘附于PVC背衬上;样品垫叠压金结合物垫2-3mm,金结合物垫叠压硝酸纤维素反应膜2-3mm,吸水纸叠压硝酸纤维素反应膜2-3mm;金结合物垫上包被了抗人IgM单克隆抗体-胶体金的结合物,硝酸纤维素反应膜质控区(7)和检测区(6)位置上分别包被了羊抗鼠IgG抗体或兔抗鼠IgG抗体和特异CN102830229BCN102839B性的基因重组梅毒螺旋体抗原。本发明产品的生产过程简单易控制;用于检测时操作简便、快速,25分钟即可判读结果,且结果不受IgG抗体的影CN102830229B权利要求书1/1页1.一种梅毒螺旋体IgM抗体胶体金法检测试剂的制备方法,其特征在于包括以下步骤:A:制备抗人IgM单克隆抗体:取多份正常人血清,混合,经透析、离心、纯化制得纯度达95%的IgM抗体,以人IgM作为抗原,经脾内注射免疫6-8周龄雌性BALB/c小鼠,取小鼠的免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合,选择性培养、筛选及克隆化获得杂交瘤细胞,将杂交瘤细胞接种于BALB/c小鼠腹腔制备腹水,以亲和层析法提纯鼠抗人IgM单克隆抗体;B:制备多克隆抗体:以步骤A所制备的鼠抗人IgM单克隆抗体免疫山羊或兔,取血清纯化后提取到羊抗小鼠IgG多克隆抗体或兔抗小鼠IgG多克隆抗体;C:制备胶体金:采用柠檬酸三钠还原法制得粒径20~40nm的胶体金颗粒;D:制备鼠抗人IgM单克隆抗体-胶体金结合物:用0.1M碳酸钾调节胶体金溶液pH值至最佳标记pH值,按照0.010~0.030mg蛋白/mL胶体金的比例加入鼠抗人IgM单克隆抗体,混匀静置,高速离心,弃上清,所得沉淀以十分之一初始胶体金体积的金结合物保存液溶解,制得鼠抗人IgM单克隆抗体-胶体金结合物;其中,金结合物保存液为含2~5%的牛血清白蛋白的pH值为8.0~8.2的0.01~0.02MTris