用于研究蛋白质-蛋白质相互作用的交联试剂、方法和组合物.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102933554A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102933554A(43)申请公布日2013.02.13(21)申请号201180011973.X代理人陈文平(22)申请日2011.03.01(51)Int.Cl.C07D229/02(2006.01)(30)优先权数据61/309,5122010.03.02USC07D403/12(2006.01)C07C237/20(2006.01)(85)PCT申请进入国家阶段日G01N33/68(2006.01)2012.08.31(86)PCT申请的申请数据PCT/US2011/0265792011.03.01(87)PCT申请的公布数据WO2011/109326EN2011.09.09(71)申请人黄玉梅地址美国马萨诸塞州(72)发明人黄玉梅(74)专利代理机构北京市金杜律师事务所11256权利要求书权利要求书5页5页说明书说明书2323页页附图附图1717页(54)发明名称用于研究蛋白质-蛋白质相互作用的交联试剂、方法和组合物(57)摘要本发明提供用于研究蛋白质-蛋白质相互作用的试剂、方法和组合物。本发明的系统和方法使蛋白质-蛋白质相互作用的体内和体外分析成为可能。与现有光交联方法相比本发明的系统和方法的各实施方案提供的优点包括，例如，(i)新型可逆交联剂，其使交联产物易于分离、纯化和富集；(ii)基于三氟甲基苯基二氮丙啶或全氟苯基二氮丙啶的光交联剂，其提供高的标记特异性、无副产物和更高的光交联效率；(iii)多功能间隔基，其使接触位点的系统标测成为可能；(iv)基于可逆连接化学分离、纯化和检测交联产物的新方法；以及(v)能够在体外、原位和体内研究相互作用位点。CN1029354ACN102933554A权利要求书1/5页1.具有式(I)的交联试剂FG2—SP1—W(I)其中FG2是氨氧基；SP1是间隔基，选自化学键、取代或未取代的(C1-C24)烷基、取代或未取代的(C1-C24)杂烷基、聚乙二醇基、多元醇基、多元胺基、聚酯基、聚磷酸二酯基、肽和拟肽基；和W是化学或光交联基团，选自芳酮基、叠氮基、重氮基、二氮丙啶基、烯酮基、烯基、二羰基、环氧基、有机硅烷基、异硫氰酸酯基、异氰酸酯基、酰叠氮基、活性酯基、磺酰氯基、碳酸酯基、酰亚胺酯基、酐基、卤代乙酰基、卤代烷基、马来酰亚胺基、乙烯砜基、硫酯基、二硫化物基团和巯基。2.如权利要求1所述的交联试剂，其中W是3-芳基-3-(三氟甲基)二氮丙啶基团。3.如权利要求1所述的交联试剂，其中W是全氟苯基叠氮基团。4.如权利要求1所述的交联试剂，其中W是卤代乙酰基、卤代烷基、马来酰亚胺基或N-羟基琥珀酰亚胺酯基团。5.如权利要求1所述的交联剂，具有结构式(A)：其中R6选自-(CH2)n-和-O(CH2CH2)n-；其中每一个n是独立选自1至16(包括端点)的整数；R8是H或烷基。6.如权利要求1所述的交联剂，具有结构式(B)：其中每一个R5和R6独立选自-(CH2)n-和-O(CH2CH2)n-；其中每一个n是独立选自1至16(包括端点)的整数；R8是H或烷基。7.如权利要求1所述的交联剂，具有结构式(C)：其中每一个R5和R6独立选自-(CH2)n-和-O(CH2CH2)n-；其中每一个n是独立选自1至16(包括端点)的整数。8.如权利要求1所述的交联剂，具有结构式(D)：其中R5选自-(CH2)n-和-O(CH2CH2)n-；其中每一个n是独立选自1至16(包括端点)的整数；R8是H或烷基。2CN102933554A权利要求书2/5页9.如权利要求1所述的交联剂，具有结构式(E)：其中每一个R独立地为氨基酸侧基。10.具有式(II)的交联剂其中R1和R2独立地为H、烷基或芳基；SP1是间隔基，选自化学键、取代或未取代的(C1-C24)烷基、取代或未取代的(C1-C24)杂烷基、聚乙二醇基、多元醇基、多元胺基、聚酯基、聚磷酸二酯基、肽和拟肽基；和W是化学或光交联基团，选自芳酮基、叠氮基、重氮基、二氮丙啶基、烯酮基、烯基、二羰基、环氧基、有机硅烷基、异硫氰酸酯基、异氰酸酯基、酰叠氮基、N-羟基琥珀酰亚胺酯基、氟苯基酯基、磺酰氯基、碳酸酯基、酰亚胺酯基、酐基、卤代乙酰基、卤代烷基、马来酰亚胺基、乙烯砜基、硫酯基、二硫化物基团和巯基。11.如权利要求10所述的交联剂，其中W是3-芳基-3-(三氟甲基)二氮丙啶基团。12.如权利要求10所述的交联剂，其中W是全氟苯基叠氮基团。13.如权利要求10所述的交联剂，其中W是卤代乙酰基、卤代烷基、马来酰亚胺基或N-羟基琥珀酰亚胺酯基团。14.如权利要求10所述的交联剂，具有结构式(F)：其中R6选自-(CH2)n-和-O(CH2CH2)n-；其中每