同型半胱氨酸的测定试剂及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106353291A(43)申请公布日2017.01.25(21)申请号201610864185.X(22)申请日2016.09.29(71)申请人浙江达美生物技术有限公司地址312000浙江省绍兴市越城区曹江路4号5幢一楼(72)发明人方朝君(74)专利代理机构绍兴市越兴专利事务所(普通合伙)33220代理人蒋卫东(51)Int.Cl.G01N21/64(2006.01)权利要求书1页说明书8页附图2页(54)发明名称同型半胱氨酸的测定试剂及其制备方法(57)摘要本发明涉及一种同型半胱氨酸测定试剂及制备方法，属于借助于测定材料的化学或物理性质来测试或分析材料技术领域。由R1a试剂、R1b试剂、R2试剂和标准样构成，R1a试剂是由TritonX-100溶解于添加有缓冲液、二硫苏糖醇的纯化水中所形成的溶液；R1b试剂是由基因重组蛋氨酸裂解酶溶解于添加有缓冲液、山梨醇、蔗糖、海藻糖、4-氨基-N,N-二甲基苯胺盐酸盐的纯化水中所形成的溶液；R2试剂是添加有盐酸、三氯化铁的纯化水中所形成的溶液；标准样是由同型半胱氨酸、牛血清蛋白、缓冲液和叠氮钠溶解于纯化水中形成的溶液。将发明应用于同型半胱氨酸的测定，具有快速灵敏、准确性好、特异性高、稳定性好等优点。CN106353291ACN106353291A权利要求书1/1页1.同型半胱氨酸的测定试剂，其特征在于：由R1a试剂、R1b试剂、R2试剂和标准样构成，所述的R1a试剂是由TritonX-100溶解于添加有缓冲液、二硫苏糖醇的纯化水中所形成的溶液；所述的R1b试剂是由基因重组蛋氨酸裂解酶溶解于添加有缓冲液、山梨醇、蔗糖、海藻糖、4-氨基-N,N-二甲基苯胺盐酸盐的纯化水中所形成的溶液；所述的R2试剂是添加有盐酸、三氯化铁的纯化水中所形成的溶液；所述的同型半胱氨酸标准样是由同型半胱氨酸、牛血清蛋白、缓冲液和叠氮钠溶解于纯化水中形成的溶液。2.如权利要求1所述的同型半胱氨酸的测定试剂，其特征在于：所述的R1a试剂中，缓冲液为三羟甲基氨基甲烷。3.如权利要求1所述的同型半胱氨酸的测定试剂，其特征在于：所述的R1b试剂中，山梨醇的浓度3%，蔗糖的浓度为2%，海藻糖的浓度为2%，4-氨基-N,N-二甲基苯胺盐酸盐浓度为20mmol/L，基因重组蛋氨酸裂解酶浓度为0.75KU/L。4.如权利要求1所述的同型半胱氨酸的测定试剂，其特征在于：所述的R2试剂中，盐酸浓度为10%，三氯化铁浓度为15mmol/L。5.如权利要求1所述的同型半胱氨酸的测定试剂，其特征在于：所述的标准样中，缓冲液为磷酸盐缓冲液。6.如权利要求1-5任一项所述同型半胱氨酸测定试剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）R1a试剂配制：向纯化水中加入缓冲液，搅拌至完全溶解；加入二硫苏糖醇(DTT)搅拌至溶解，加入TritonX-100，搅拌至溶解，继续搅拌后定容；（2）R1b试剂配制：向纯化水中加入缓冲液，搅拌至完全溶解；加入山梨醇搅拌至溶解，加入蔗糖，搅拌至溶解；加入海藻糖，搅拌至溶解；加入4-氨基-N,N-二甲基苯胺盐酸盐，搅拌至溶解；加入基因重组蛋氨酸裂解酶搅拌至完全溶解，继续搅拌后定容；（3）R2试剂配制：向纯化水中加入盐酸，搅拌至完全溶解；加入三氯化铁，搅拌至溶解，继续搅拌后定容；（4）同型半胱氨酸标准样配制：向纯化水中加入同型半胱氨酸，搅拌至完全溶解；加入缓冲液搅拌至溶解，加入牛血清蛋白搅拌至溶解；加入叠氮钠搅拌至完全溶解；继续搅拌后定容；（5）对上述制备的R1a试剂、R1b试剂和R2试剂及同型半胱氨酸标准样进行灵敏度、线性范围、精密度和准确度进行测定。7.如权利要求6所述的同型半胱氨酸测定试剂的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，所述的纯化水初始体积为400ml，定容体积为500ml。8.如权利要求6所述的同型半胱氨酸测定试剂的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，所述的纯化水初始体积为2ml，定容体积为3ml。9.如权利要求6所述的同型半胱氨酸测定试剂的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，所述的纯化水初始体积为80ml，定容体积为100ml。10.如权利要求6所述的同型半胱氨酸测定试剂的制备方法，其特征在于：步骤（4）中，所述的纯化水初始体积为80ml，定容体积为100ml。2CN106353291A说明书1/8页同型半胱氨酸的测定试剂及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及一种同型半胱氨酸的测定试剂及其制备方法，属于借助于测定材料的化学或物理性质来测试或分析材料技术领域。背景技术[0002]同型半胱氨酸(高半胱氨酸,Hcy)是含硫氨基酸，在细胞内蛋氨酸脱甲基生成。同型半胱氨酸经甲基化生成蛋氨酸，此过程需活性维生素B12及四氢叶酸作为