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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106635945A(43)申请公布日2017.05.10(21)申请号201611250306.8C12R1/19(2006.01)(22)申请日2016.12.29(83)生物保藏信息CGMCCNo.134032016.11.30(71)申请人廊坊梅花生物技术开发有限公司地址065001河北省廊坊市开发区华祥路66号(72)发明人张捧程江红刁刘洋毛贤军(74)专利代理机构北京集佳知识产权代理有限公司11227代理人赵青朵(51)Int.Cl.C12N1/21(2006.01)C12N15/70(2006.01)权利要求书2页说明书8页C12P13/08(2006.01)序列表4页(54)发明名称重组菌株及其制备方法和生产L-苏氨酸的方法(57)摘要本发明涉及微生物技术领域,特别涉及重组菌株及其制备方法和生产L-苏氨酸的方法。该重组菌株以大肠杆菌为出发菌株进行改造,其改造包括:强化pntAB基因和异源引入pyc基因。本发明得到重组菌株经发酵培养,产苏氨酸的量可达12.4g/L,糖酸转化率可达16.2%,且在发酵培养过程中无副产物乙酸形成。CN106635945ACN106635945A权利要求书1/2页1.一种重组菌株,其特征在于,以大肠杆菌为出发菌株进行改造,其改造包括:强化pntAB基因和异源引入pyc基因。2.根据权利要求1所述的重组菌株,其特征在于,所述强化pntAB基因为:将pntAB基因的天然启动子更换为Ptac启动子。3.根据权利要求1或2所述的重组菌株,其特征在于,所述pyc基因的来源为谷氨酸棒状杆菌。4.根据权利要求1至3中任一项所述的重组菌株,其特征在于,所述出发菌株为大肠杆菌MHZ-0213-3。5.根据权利要求1至4中任一项所述的重组菌株,其特征在于,所述重组菌株的保藏编号为CGMCCNo.13403。6.一种重组菌株的构建方法,其特征在于,包括:以大肠杆菌为出发菌株进行改造,其改造包括:强化pntAB基因和异源引入pyc基因。7.根据权利要求6所述的构建方法,其特征在于,所述改造采用CRISPR-Cas9基因编辑技术进行。8.一种生产L-苏氨酸的方法,其特征在于,采用如权利要求1至5中任一项所述的重组菌株或如权利要求6或7所述构建方法构建得到的重组菌株为发酵菌株。9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述生产L-苏氨酸的方法为:将重组菌株进行活化,接种到种子培养基进行种子培养,然后接种到发酵培养基进行发酵培养。10.根据权利要求9所述的方法,其特征在于,所述种子培养基包括:所述发酵培养基包括:2CN106635945A权利要求书2/2页3CN106635945A说明书1/8页重组菌株及其制备方法和生产L-苏氨酸的方法技术领域[0001]本发明涉及微生物技术领域,特别涉及重组菌株及其制备方法和生产L-苏氨酸的方法。背景技术[0002]L-苏氨酸(Thr)是人和动物生长所必需的8种氨基酸之一,其广泛应用于饲料、食品添加及药物辅助材料制备等。苏氨酸是一种重要的营养强化剂,可以强化谷物、糕点、乳制品,和色氨酸一样有缓解人体疲劳,促进生长发育的效果。医药上,由于苏氨酸的结构中含有羟基,对人体皮肤具有持水作用,与寡糖链结合,对保护细胞膜起重要作用,在体内能促进磷脂合成和脂肪酸氧化。其制剂具有促进人体发育抗脂肪肝药用效能,是复合氨基酸输液中的一个成分。同时,苏氨酸又是制造一类高效低过敏的抗生素-单酰胺菌素的原料。[0003]目前L-苏氨酸主要通过微生物发酵生产,多种细菌可用于L-苏氨酸生产,如大肠杆菌、棒状杆菌属、沙雷氏菌属等的野生型诱导获得的突变株作为生产菌株。具体实例包括抗氨基酸类似物突变株或甲硫氨酸、赖氨酸、异亮氨酸等多种营养缺陷型(日本专利申请公开号224684/83;韩国专利申请公开号8022/87)。然而,传统诱变育种由于随机突变造成菌株生长缓慢及产生较多副产物,不易获得高产菌株。[0004]随着全球苏氨酸需求量的不断增加,高产苏氨酸菌株的构建和改造尤为重要。2003年韩国CJ株式会社申请的中国专利CN03811059.8中,利用大肠杆菌,通过缺失苏氨酸操纵子序列的第-56至-18位的39bp序列,增强苏氨酸合成关键基因thrABC表达,苏氨酸生产力提高22%。2016年梅花集团申请的中国专利201610119758.6中,通过强化thrA*BC、敲除tdh获得MHZ-0213-3菌株,该菌株苏氨酸产量为4.2g/L、转化率约为8.9%,且无质粒负担。发明内容[0005]有鉴于此,本发明提供了重组菌株及其制备方法和生产L-苏氨酸的方法。本发明提供的重组菌株经发酵培养,产苏氨酸的量可达12.4g/L,糖酸转化率可达16.2