抗菌肽CNAP‑Ⅰ、抗菌肽CNAP‑Ⅱ及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107325158A(43)申请公布日2017.11.07(21)申请号201710605995.8(22)申请日2017.07.24(71)申请人浙江海洋大学地址316022浙江省舟山市定海区临城街道海大南路1号(72)发明人薛德奖陈静(74)专利代理机构杭州千克知识产权代理有限公司33246代理人贾森君(51)Int.Cl.C07K7/08(2006.01)C07K7/06(2006.01)C12P21/06(2006.01)A61P31/04(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图1页(54)发明名称抗菌肽CNAP-Ⅰ、抗菌肽CNAP-Ⅱ及其制备方法和应用(57)摘要本发明涉及抗菌肽CNAP-Ⅰ、抗菌肽CNAP-Ⅱ及其制备方法和应用，属于生物技术领域。抗菌肽CNAP-Ⅰ的氨基酸序列为QLASREPDGTFFFYI，抗菌肽CNAP-Ⅱ的氨基酸序列QLASREPDGT。其制备方法为：取新鲜的梅鱼鱼肉，利用B.cereus蛋白酶水解梅鱼蛋白，制取梅鱼蛋白酶解液，经分离纯化后，得到抗菌肽CNAP-Ⅰ和CNAP-Ⅱ，B.cereus蛋白酶可先经弱磁场处理。制得的抗菌肽CNAP-Ⅰ、抗菌肽CNAP-Ⅱ用作抑菌剂，在食品抗菌防腐领域具有很好的应用前景。CN107325158ACN107325158A权利要求书1/1页1.抗菌肽CNAP-Ⅰ，其特征在于，所述抗菌肽CNAP-Ⅰ的氨基酸序列为QLASREPDGTFFFYI。2.抗菌肽CNAP-Ⅱ，其特征在于，所述抗菌肽CNAP-Ⅱ的氨基酸序列为QLASREPDGT。3.抗菌肽CNAP-Ⅰ和CNAP-Ⅱ的制备方法，其特征在于，所述制备方法为：取新鲜的梅鱼鱼肉，利用B.cereus蛋白酶水解梅鱼蛋白，制取梅鱼蛋白酶解液，经分离纯化后，得到抗菌肽CNAP-Ⅰ和CNAP-Ⅱ。4.根据权利要求3所述的抗菌肽CNAP-Ⅰ和CNAP-Ⅱ的制备方法，其特征在于，所述B.cereus蛋白酶经弱磁场处理。5.根据权利要求4所述的抗菌肽CNAP-Ⅰ和CNAP-Ⅱ的制备方法，其特征在于，所述弱磁场的磁场强度为5-15mT。6.抗菌肽CNAP-Ⅰ的应用，其特征在于，所述抗菌肽CNAP-Ⅰ用作抑菌剂。7.抗菌肽CNAP-Ⅱ的应用，其特征在于，所述抗菌肽CNAP-Ⅱ用作抑菌剂。2CN107325158A说明书1/4页抗菌肽CNAP-Ⅰ、抗菌肽CNAP-Ⅱ及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及抗菌肽，尤其涉及抗菌肽CNAP-Ⅰ、抗菌肽CNAP-Ⅱ及其制备方法和应用，属于生物技术领域。背景技术[0002]近年来，食源性疾病的发生率居高不下，全球每年发生40-60亿食源性腹泻病例，其中70％是由各类致病微生物污染食品或饮水所致。因为，畜禽、水产养殖过程中抗生素的广泛使用，致使许多病原菌对其产生了耐药性，且容易在动物体内残留，严重影响产品品质。因此，寻找无毒、无公害、高效的食品抑菌方法已成为食品保鲜和畜禽、水产养殖领域的当务之急。[0003]抗菌肽以其优良的抗菌性在抗菌保鲜领域得到广泛应用。目前，抗菌肽的制备方法主要有直接提取法、化学合成法、基因工程表达法、酶解法。其中，酶解法具有反应条件温和、反应过程容易控制、易于得到新型抗菌肽等优点，已成为大批量生产抗菌肽有前景的方法。然而，迄今已获得规模化制备的抗菌肽的活性普遍偏低，而菌肽改性和修饰技术成本较昂贵，仅在医药领域具有较高的应用前景，仍难以达到食品防腐和水产、畜禽养殖领域的抗菌防腐要求(低成本、高活性)。因此，开发新型高活性抗菌肽已成为食品加工与安全领域的重中之重。发明内容[0004]本发明的目的是针对现有技术中存在的上述问题，提出了一种抗菌肽CNAP-Ⅰ，所述抗菌肽CNAP-Ⅰ的氨基酸序列为QLASREPDGTFFFYI。该富含苯丙氨酸(Phe)残基的抗菌肽CNAP-Ⅰ对大肠杆菌等有显著的抑制作用，抑菌圈直径达20.5±0.4mm，显示了极高的抗菌活性，在食品抗菌防腐领域具有很好的应用前景。[0005]本发明还提供了抗菌肽CNAP-Ⅱ，所述抗菌肽CNAP-Ⅱ的氨基酸序列为QLASREPDGT。抗菌肽CNAP-Ⅱ是由抗菌肽CNAP-Ⅰ进一步酶解以Phe为-NH-供体的肽键获得的，抗菌肽CNAP-Ⅱ不含苯丙氨酸(Phe)残基。[0006]本发明还提供了抗菌肽CNAP-Ⅰ和CNAP-Ⅱ的制备方法，所述制备方法为：取新鲜的梅鱼鱼肉，利用B.cereus蛋白酶(即蜡状芽孢杆菌)水解梅鱼蛋白，制取梅鱼蛋白酶解液，经分离纯化后，得到抗菌肽CNAP-Ⅰ和CNAP-Ⅱ。优质的前体物质是开发高活性抗菌肽的基础。近年来，海洋生物源抗菌肽因其优越的营养功能和广泛的生物学活性，被认为是优质的抗菌肽类型之一。