一种用于鉴别鹿角的引物探针组合物及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110331215A(43)申请公布日2019.10.15(21)申请号201910657475.0(22)申请日2019.07.19(71)申请人上海市食品药品检验所地址200120上海市浦东新区张衡路1500号(72)发明人季申潘杰冯睿张静娴胡青张甦苗水李丽敏王少敏孙健毛丹刘贤贤(74)专利代理机构上海申新律师事务所31272代理人车超平(51)Int.Cl.C12Q1/6888(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书5页序列表1页附图3页(54)发明名称一种用于鉴别鹿角的引物探针组合物及其应用(57)摘要本发明公开了一种用于鉴别鹿角的引物探针组合物，其包括：引物F1、引物R1、探针P1；其中，所述引物F1为如SEQIDNo.1所示序列的单链DNA分子；所述引物R1为如SEQIDNo.2所示序列的单链DNA分子；所述探针P1为如SEQIDNo.3所示序列的单链DNA分子；其中上述引物、探针也可为将其对应的序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与该对应的序列具有相同功能的DNA分子。本发明还涉及含有上述引物探针组合物的试剂盒和系统及其应用。本发明将马鹿、梅花鹿与其余18种鹿科动物以及猪牛羊的完整线粒体基因序列进行对比，建立了一种从分子水平对真伪鹿角的鉴别试剂盒，具有简单，快速，高特异性和高灵敏度的特点。CN110331215ACN110331215A权利要求书1/1页1.一种用于鉴别鹿角的引物探针组合物，其特征在于，包括：引物F1、引物R1、探针P1；其中，所述引物F1为如SEQIDNo.1所示序列的单链DNA分子，或为将SEQIDNo.1所示序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与该序列具有相同功能的DNA分子；所述引物R1为如SEQIDNo.2所示序列的单链DNA分子，或为将SEQIDNo.2所示序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与该序列具有相同功能的DNA分子；所述探针P1为如SEQIDNo.3所示序列的单链DNA分子，或为将SEQIDNo.3所示序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与该序列具有相同功能的DNA分子。2.根据权利要求1所述的一种用于鉴别鹿角的引物探针组合物，其特征在于，所述探针P1由荧光基团和荧光淬灭基团修饰；其中，所述荧光基团选自FAM、VIC、HEX、JOE、ROX、Cy5，所述荧光淬灭基团选自BHQ1、BHQ2、TAMRA。3.一种含有权利要求1或2所述的用于鉴别鹿角的引物探针组合物的试剂盒。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中，引物F1、引物R1、探针P1的浓度均为10μM。5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：反应预混液、DNA模板、双蒸水。6.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒采用的扩增反应体系为：反应预混液10μL，引物F1、引物R1、探针P1各0.5μL，DNA模板2μL，双蒸水6.5μL；其中，各引物、探针在扩增反应体系中的浓度均为250nM，DNA模板在扩增反应体系中的浓度为5ng/μL。7.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括正品鹿角阳性对照品、阴性对照品以及空白对照品。8.一种含有权利要求1或2所述的引物探针组合物、或含有权利要求4～6中任一项所述的试剂盒的系统。9.根据权利要求7所述的系统，其特征在于，所述系统还包括利用定量PCR鉴别鹿角所需要的仪器。10.一种如权利要求1或2所述的引物探针组合物、或如权利要求4～7中任一项所述的试剂盒、或权利要求9所述的系统在鉴别鹿角中的应用。11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述应用包括：用于鉴别正品鹿角和伪品鹿角，或者用于检测待测鹿角样本中是否含有正品鹿角成分。2CN110331215A说明书1/5页一种用于鉴别鹿角的引物探针组合物及其应用技术领域[0001]本发明属于分子生物学技术领域，尤其涉及一种用于鉴别鹿角的引物探针组合物及其应用。背景技术[0002]中国药典2015年版规定鹿角来源为马鹿和梅花鹿，其饮片规格为极薄片和鹿角粉，无法从性状上加以区分，也没有专属的鉴别方法，造成了造假的重灾区，给鹿角市场造成了巨大冲击。[0003]根据有关文献报道，目前已出现从DNA分子水平对物种加以界定，每个物种的DNA序列都存在有一定的不同，根据序列的SNP位点来设计特异性引物和探针组合可以对物种进行有效鉴别，采用该分子水平的界别可作为传统形态鉴别方法的有效补充。发明内容[0004]为了克服现有技术所存在的缺陷，本发明依据鹿科动物基因树，发现马鹿和梅花鹿遗传距离最小，并对其和其余鹿科动物进