基于美洲大蠊Orco基因设计的dsRNA、编码基因及其制备方法与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110468131A(43)申请公布日2019.11.19(21)申请号201910742626.2A01N57/16(2006.01)(22)申请日2019.08.13A01P7/04(2006.01)(71)申请人华南师范大学地址510631广东省广州市中山大道西55号华南师范大学生命科学学院昆虫科学与技术研究所申请人梅州市华师昆虫发育生物学与应用技术重点实验室广梅园研发中心(72)发明人李娜李胜黄润(74)专利代理机构广州嘉权专利商标事务所有限公司44205代理人肖云(51)Int.Cl.C12N15/113(2010.01)C12N15/10(2006.01)权利要求书1页说明书7页序列表4页附图2页(54)发明名称基于美洲大蠊Orco基因设计的dsRNA、编码基因及其制备方法与应用(57)摘要本发明公开了基于美洲大蠊Orco基因设计的dsRNA、编码基因及其制备方法与应用，所述dsRNA为由如SeqIDNo.1所示的核苷酸序列作为正义链及由与SeqIDNo.1所示的核苷酸序列反向互补的核苷酸序列组成反义链的双链RNA。所述dsRNA可广泛应用于制备防治美洲大蠊、干扰美洲大蠊化学通讯或控制美洲大蠊成虫交配繁殖的产品或防控美洲大蠊及其他具有相同基因靶标序列的昆虫中。通过阻断美洲大蠊嗅觉系统的关键基因，抑制性信息素对雄虫的诱导作用，可有效控制美洲大蠊的交配和繁殖，为美洲大蠊的防控提供了新的技术和策略。CN110468131ACN110468131A权利要求书1/1页1.基于美洲大蠊Orco基因设计的dsRNA，其特征在于：所述dsRNA为由如SeqIDNo.1所示的核苷酸序列作为正义链及由与SeqIDNo.1所示的核苷酸序列反向互补的核苷酸序列作为反义链组成的双链RNA。2.如权利要求1所述的dsRNA的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：将核苷酸序列如SeqIDNo.5所示的DNA片段克隆到载体中，基于克隆后的载体设计引物并进行PCR扩增，将PCR扩增产物转录合成即得。3.编码如权利要求1所述的dsRNA的基因。4.一种如权利要求3所述的基因的制备方法，其特征在于：基于所述基因的序列设计包含有T7启动子引物对，进行PCR扩增即得。5.含有如权利要求3所述的基因的表达载体、表达盒、转基因细胞系或宿主菌。6.如权利要求1所述的dsRNA在制备用于防治美洲大蠊、干扰美洲大蠊化学通讯或控制美洲大蠊成虫交配繁殖的产品或防控美洲大蠊中的应用。7.一种防控美洲大蠊的方法，其特征在于：包括以下步骤：将如权利要求2所述的dsRNA导入到美洲大蠊雄虫体内。8.根据权利要求7所述的防控美洲大蠊的方法，其特征在于：所述导入操作为注射操作；优选地，所述注射操作是从沿腹部从下往上方向的第3至第4腹节处注入。9.根据权利要求7所述的防控美洲大蠊的方法，其特征在于：导入操作是在羽化后的第三天。10.根据权利要求9所述的防控美洲大蠊的方法，其特征在于：所述方法还包括在羽化后的第五天重复导入操作一次。2CN110468131A说明书1/7页基于美洲大蠊Orco基因设计的dsRNA、编码基因及其制备方法与应用技术领域[0001]本发明涉及卫生害虫防治领域，具体涉及基于美洲大蠊Orco基因设计的dsRNA、编码基因及其制备方法与应用。背景技术[0002]蟑螂是一类重要的世界性卫生害虫，对人类健康和公共卫生造成严重危害。蟑螂携带多种病原微生物，可引发霍乱、炭疽、结核等传染性疾病。蟑螂排泄物和虫蜕也是重要的过敏原，容易导致皮疹、哮喘等过敏反应。因此，从源头遏止蟑螂的繁殖和种群扩张成为卫生害虫防治领域中亟需解决并渐趋紧迫的重要问题。[0003]美洲大蠊(PeriplanetaamericanaL.)是蜚蠊目蟑螂中最常见种之一，也是华南地区优势种群，具有超强的环境适应能力和生命力，惊人的繁殖力和解毒能力。美洲大蠊在我国已发展为城镇蟑螂群落的优势物种，加之全球温室效应逐渐增强，危害和爆发频率逐年加重并且有不断北迁的趋势。目前对美洲大蠊防治仍主要依赖于传统的化学农药，但抗药性、药剂残留和再猖獗等问题日益攀升，严重威胁着人畜健康和生态环境。因此，发掘新的生物防治方法、探索新的美洲大蠊防治策略势在必行。[0004]交配行为是昆虫实现个体繁殖和种群扩张的关键环节，而雌雄具有不同的交配行为特征。如在交配前，美洲大蠊雌虫会展露性腺并释放挥发性气味，激发雄虫产生性兴奋，增加触角摆动频率，增强虫体活动能力，从而形成定位、探查、趋近、交尾等一系列交配行为。在此过程中，对外界气味化合物(或性信息素)的识别是引起交配行为的首要条件。[0005]昆虫嗅觉系统是识别气味化合物，尤其是性信息素的主要感知系统，包括中枢神经