基于美洲大蠊嗅觉受体基因OR3X设计的dsRNA、编码基因及其制备方法与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112522278A(43)申请公布日2021.03.19(21)申请号202011593770.3C12N15/113(2010.01)(22)申请日2020.12.29C12N15/10(2006.01)A01N57/16(2006.01)(71)申请人华南师范大学A01P7/04(2006.01)地址510631广东省广州市中山大道西55号华南师范大学生命科学学院昆虫科学与技术研究所申请人梅州市华师昆虫发育生物学与应用技术重点实验室广梅园研发中心(72)发明人李娜李胜陈竞游朱伸董任科(74)专利代理机构广州嘉权专利商标事务所有限公司44205代理人胡辉(51)Int.Cl.C12N15/12(2006.01)权利要求书1页说明书8页序列表4页附图2页(54)发明名称基于美洲大蠊嗅觉受体基因OR3X设计的dsRNA、编码基因及其制备方法与应用(57)摘要本发明公开了基于美洲大蠊嗅觉受体基因OR3X设计的dsRNA、编码基因及其制备方法与应用，所述基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。通过设计合成了靶向沉默美洲大蠊嗅觉受体基因OR3X的dsRNA序列，将该dsRNA导入美洲大蠊体内，能够显著抑制OR3X基因的表达，以干扰雌、雄成虫或美洲大蠊幼虫所释放的聚集信息素识别，从而达到阻断美洲大蠊正常聚集，最终达到防治美洲大蠊的目的，本发明提供了一种对环境友好、高效、低毒的蟑螂防治方法，为美洲大蠊的防控提供了新的技术和策略。CN112522278ACN112522278A权利要求书1/1页1.一种美洲大蠊嗅觉受体基因OR3X，其特征在于：所述基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。2.一种制备如权利要求1所述的基因OR3X的干扰序列dsRNA的方法，其特征在于：包括以下步骤：以美洲大蠊嗅觉受体基因OR3X的cDNA为模板，以干扰引物组为引物进行PCR扩增。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述干扰引物组包括上游引物OR3XFp和下游引物OR3XRp，其中，所述上游引物OR3XFp的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示；所述下游引物OR3XRp的核苷酸序列如SEQIDNO.6所示。4.一种如权利要求1所述基因OR3X的干扰序列dsRNA，其特征在于：所述dsRNA为由如SEQIDNo.2所示的核苷酸序列作为正义链及与SEQIDNo.2所示的核苷酸序列反向互补的核苷酸序列SEQIDNo.3作为反义链组成的双链RNA。5.如权利要求4所述的dsRNA，其特征在于：所述dsRNA的核苷酸序列如SEQIDNo.9所示。6.如权利要求4所述的dsRNA在制备用于美洲大蠊防治药物中的应用。7.如权利要求4所述的dsRNA在制备用于干扰美洲大蠊聚集成群的产品中的应用。8.如权利要求4所述的dsRNA在制备用于控制美洲大蠊繁殖产品中的应用。9.如权利要求1所述的基因OR3X在制备美洲大蠊防治药物中的应用。10.一种防治美洲大蠊的方法，包括以下步骤：将如权利要求4所述的dsRNA导入到美洲大蠊体内。2CN112522278A说明书1/8页基于美洲大蠊嗅觉受体基因OR3X设计的dsRNA、编码基因及其制备方法与应用技术领域[0001]本发明涉及卫生害虫防治领域，具体涉及基于美洲大蠊嗅觉受体基因OR3X设计的dsRNA、编码基因及其制备方法与应用。背景技术[0002]蟑螂是一类重要的世界性卫生害虫，对人类健康和公共卫生造成严重危害。蟑螂携带多种病原微生物，可引发霍乱、炭疽、结核等传染性疾病，也会引起皮疹、哮喘等过敏反应。美洲大蠊(PeriplanetaamericanaL.)是蜚蠊目蟑螂中最常见种之一，也是华南地区优势种群，具有超强的环境适应能力和生命力，惊人的繁殖力和解毒能力。美洲大蠊在我国已发展为城镇蟑螂群落的优势物种，加之全球温室效应逐渐增强，危害和爆发频率逐年加重并且有不断北迁的趋势。[0003]群聚行为对于种群的维持及单个个体的生存都有非常重要的意义，比如动物大规模的集体迁徙，寻找新资源，躲避天敌，集体同步繁殖等。群聚行为可以提高美洲大蠊繁殖后代的成功率和后代的生存能力。例如，美洲大蠊通过调整生殖周期的同步性来降低配偶与其他雌性聚集的机会，同时也增加了后代的生存能力，美洲大蠊可聚集产卵，从而增加后代躲避天敌的能力，并且保证同步孵化；美洲大蠊可群聚而行，为后代躲避天敌以及获得充足的食物提供了保证，提高后代的的存活率，保持种群的繁衍。[0004]昆虫嗅觉系统是识别气味化合物的主要感知系统，包括中枢神经系统和外周神经系统，其中触角是外周神经系统的延伸。昆虫对外界的气味分子的识别主要依赖于触角。触角表面分布着不同类型的嗅觉感受器(俗称感觉毛)，感受器的表皮上有许多孔隙，