生产L-氨基酸的重组菌株及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111334535A(43)申请公布日2020.06.26(21)申请号202010223507.9C12N15/77(2006.01)(22)申请日2020.03.26C12R1/15(2006.01)(83)生物保藏信息CGMCCNo.169282018.12.12(71)申请人廊坊梅花生物技术开发有限公司地址065001河北省廊坊市开发区华祥路66号(72)发明人栾明月程江红贾贝贝吴涛赵津津李岩(74)专利代理机构北京集佳知识产权代理有限公司11227代理人潘颖(51)Int.Cl.C12P13/14(2006.01)权利要求书1页说明书6页C12N1/21(2006.01)序列表3页(54)发明名称生产L-氨基酸的重组菌株及其应用(57)摘要本发明涉及微生物领域，特别涉及生产L-氨基酸的重组菌株及其应用。本发明提供了重组菌株及其用于发酵生产谷氨酸的用途。实验结果表明，相比于对照菌ATCC13869，acnR基因失活修饰的菌株ATCC13869ΔacnR显著(P＜0.05)提高了谷氨酸的发酵产量，产量为27.31g/L。CN111334535ACN111334535A权利要求书1/1页1.失活acnR基因或抑制acnR基因的表达在生产L-谷氨酸中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述失活acnR基因包括敲除acnR基因或敲低acnR基因。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抑制acnR基因的表达包括不产生AcnR蛋白、由acnR基因编码的蛋白量降低或对蛋白结构进行修饰产生不正常的AcnR蛋白。4.菌株，其特征在于，失活acnR基因或抑制acnR基因的表达。5.如权利要求4所述的菌株，其特征在于，所述失活acnR基因包括敲除acnR基因或敲低acnR基因。6.如权利要求5所述的菌株，其特征在于，所述抑制acnR基因的表达包括不产生AcnR蛋白、由acnR基因编码的蛋白量降低或对蛋白结构进行修饰产生不正常的AcnR蛋白。7.如权利要求4至6任一项所述的菌株，其特征在于，出发菌株为谷氨酸棒杆菌ATCC13869或ATCC13032。8.如权利要求7所述的菌株，其特征在于，其保藏编号为CGMCCNo.16928。9.如权利要求4至8任一项所述的菌株在生产L-谷氨酸中的应用。10.生产L-谷氨酸的方法，其特征在于，以如权利要求4至8任一项所述的菌株为发酵菌株。2CN111334535A说明书1/6页生产L-氨基酸的重组菌株及其应用技术领域[0001]本发明涉及微生物领域，特别涉及生产L-氨基酸的重组菌株及其应用。背景技术[0002]谷氨酸(Glutamicacid)作为全球产量最大的氨基酸品种，其需求量高达2500万吨。L-谷氨酸钠和聚谷氨酸等下游产品被广泛应用于食品、医药、化妆品以及农业等行业。因此，如何提高L-谷氨酸的产量是目前面临的重要课题。[0003]工业上，通常使用短杆菌属(Brevibacterium)或棒杆菌属(Corynebacterium)等的棒状杆菌型细菌来发酵生产L-谷氨酸。为了改善这些细菌的生产能力，通常使用从自然界分离的菌株，或人工突变的菌株或基因重组的菌株。[0004]谷氨酸棒杆菌为生物素缺陷型，当生物素被限量添加时，菌体则大量分泌产生谷氨酸，因而野生型的谷氨酸棒杆菌可通过生物素限量添加来诱导分泌产生谷氨酸。此外，在生物素过量的情况下通过添加某种表面活性剂如Twee40或Tween60也能诱导谷氨酸棒杆菌过量合成谷氨酸。但是上述方案对产量的增加效果不显著，无法满足日益增长的需求。发明内容[0005]有鉴于此，用于生产L-氨基酸的重组菌及其应用。实验结果表明，通过失活顺乌头酸酶转录抑制因子编码基因acnR，使得棒状杆菌型细菌在培养基或细胞中产生和积累L-氨基酸特别是L-谷氨酸，并从所述的培养基或细胞中收集L-氨基酸。与野生菌株相比，本发明提供的菌株显著(P＜0.05)提高了谷氨酸的发酵产量。[0006]为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：[0007]本发明实验结果表明，失活acnR基因或抑制acnR基因的表达在生产L-谷氨酸中的应用。[0008]在本发明的一些具体实施方案中，所述失活acnR基因包括敲除acnR基因或敲低acnR基因。[0009]在本发明的一些具体实施方案中，所述抑制acnR基因的表达包括不产生AcnR蛋白、由acnR基因编码的蛋白量降低或对蛋白结构进行修饰产生不正常的AcnR蛋白。[0010]在上述研究的基础上，本发明提供了菌株，失活acnR基因或抑制acnR基因的表达。[0011]在本发明的一些具体实施方案中，所述失活acnR基因包括敲除acnR基因或敲低acnR基因。[001