一种从小叶莲中提取分离半日花烷型二萜类化合物的方法及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105669415A(43)申请公布日2016.06.15(21)申请号201610200464.6C07C45/78(2006.01)(2006.01)(22)申请日2016.03.31C07C35/36C07C29/76(2006.01)河南中医学院(71)申请人A61P35/00(2006.01)地址450008河南省郑州市金水区金水路1号(72)发明人孙彦君张艳丽沈继朵王俊敏纪宝玉陈辉郝志友高美玲付露(74)专利代理机构郑州天阳专利事务所(普通合伙)41113代理人聂孟民(51)Int.Cl.C07C49/242(2006.01)权利要求书5页说明书11页(54)发明名称一种从小叶莲中提取分离半日花烷型二萜类化合物的方法及其应用(57)摘要本发明涉及从小叶莲中提取半日花烷型二萜类化合物的方法及其应用，有效解决从小叶莲中提取半日花烷型二萜类化合物及纯度测定和制备抗乳腺癌、肝癌药物中的应用问题，将小叶莲用乙醇提取，将乙醇提取物混悬于蒸馏水中，依次以石油醚、二氯甲烷萃取，将二氯甲烷萃取部位上硅胶柱，石油醚-丙酮洗脱，收集215个流份，合并流份1–50、51–134、135–178、179–215，得到组份Fr.1-Fr.4；将组份Fr.4上SephadexLH-20柱，甲醇洗脱，收集22个流份，合并流份1–4、5–22，得到亚组份Fr.4-1、Fr.4-2；将亚组份Fr.4-2经开放ODS柱色谱，甲醇-水洗脱，收集45个流份，硅胶薄层色谱检测分析，分别合并含有labda-7,13-diene-3,15-diol(I)和14,15-dinor-3β-hydroxy-7-labden-13-one(II)的流份，本发明方法稳定可靠，易操作，有效用于制备抗乳腺癌、肝癌药物。CN105669415ACN105669415A权利要求书1/5页1.一种从小叶莲中提取分离半日花烷型二萜类化合物的制备方法，其特征在于，该化合物为labda-7,13-diene-3,15-diol(I)和14,15-dinor-3β-hydroxy-7-labden-13-one(II)，分子结构式分别为：其制备方法是，将小叶莲6–9kg用小叶莲重量2–5倍、体积浓度为75％–95％的乙醇加热回流提取3次，提取温度为90–95℃，提取时间为1.5–2小时，减压回收乙醇得浸膏状乙醇提取物，将乙醇提取物混悬于2–3.2L的蒸馏水中，依次以石油醚、二氯甲烷萃取3次，每次2–3.2L；将二氯甲烷萃取部位上硅胶柱，依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10、100:30的石油醚-丙酮混合溶剂进行梯度洗脱，每一梯度用10–15L洗脱液，流速为10–15mLmin-1，每200–300ml体积为一流份，收集215个流份，各个流份用GF254薄层板，以体积比1︰1的石油醚-丙酮作为展开剂，以体积比10︰90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，进行硅胶薄层色谱检测，根据硅胶薄层色谱检测结果合并流份1–50、51–134、135–178、179–215，得到组份Fr.1、组份Fr.2、组份Fr.3和组份Fr.4；将组份Fr.4上SephadexLH-20柱，用甲醇洗脱，流速为1–2mLmin-1，每5–10mL为一流份，收集22个流份，各个流份用GF254薄层板，以体积比3︰1的石油醚-丙酮作为展开剂，以体积比10︰90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，进行硅胶薄层色谱检测分析，根据硅胶薄层色谱检测结果合并流份1–4、5–22，得到亚组份Fr.4-1、亚组份Fr.4-2；将亚组份Fr.4-2经开放ODS柱色谱，用体积比40:60、50:50、60:40、80:20的甲醇-水作洗脱液进行洗脱，流速为1-5mLmin-1，每3–7ml体积为一流份，共收集45个流份，各个流份用GF254薄层板，以体积比4︰1的二氯甲烷-丙酮作为展开剂，以体积比10︰90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，进行硅胶薄层色谱检测分析，分别合并含有目标物labda-7,13-diene-3,15-diol(I)和14,15-dinor-3β-hydroxy-7-labden-13-one(II)的流份，并分别进行纯度测定，得到labda-7,13-diene-3,15-diol(I)和14,15-dinor-3β-hydroxy-7-labden-13-one(II)。2.根据权利要求1所述的从小叶莲中提取分离半日花烷型二萜类化合物的制备方法，其特征在于，将小叶莲9kg用小叶莲重量3倍、体积浓度为95％的乙醇加热回流提取3次，提取温度为95℃，提取时间为