一种穿心莲多倍体诱导方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107027622A(43)申请公布日2017.08.11(21)申请号201710042433.7(22)申请日2017.01.20(71)申请人广东药科大学地址510006广东省珠海市宝岗光汉直街40号(72)发明人李明马婷玉段修冉潘丽萍(74)专利代理机构北京精金石专利代理事务所(普通合伙)11470代理人刘晔(51)Int.Cl.A01H1/08(2006.01)A01H4/00(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图2页(54)发明名称一种穿心莲多倍体诱导方法(57)摘要本发明涉及一种穿心莲多倍体诱导方法，该方法以穿心莲丛生芽为诱导材料，经含有100～2000mg·L-1的秋水仙素和1％二甲基亚砜的溶液进行预处理，用无菌水洗干净后，转接到相应培养基继续培养，根据生长状况不断更换培养基，获得多倍体丛生芽，再经生根、练苗培养获得正常生长的植株。本发明首次以穿心莲腋芽组织再生的丛生芽为诱导材料，结合所采用的诱导培养方法，显著提高了穿心莲多倍体的诱导率，高达62.86％，成活率79.05％，以及降低了嵌合体的发生率。获得的穿心莲四倍体叶面积、茎等都较二倍体巨大，有利于提高穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的产量，满足人们对穿心莲药材及其相关产品的需求。CN107027622ACN107027622A权利要求书1/1页1.一种穿心莲多倍体诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)无菌苗的培养：将普通穿心莲二倍体种子用0.1％升汞消毒一次，浸泡3min；消毒后的种子用无菌蒸馏水冲洗4～5次；冲洗完的种子在无菌水中浸泡24h备用；将种子接种于初代培养基中培养20～30天，获得无菌苗；(2)丛生芽的诱导：在无菌条件下，将无菌苗的带腋芽茎转接到丛生芽培养基中培养30～45天，获得丛生芽；(3)秋水仙素和二甲基亚砜的处理：在无菌条件下，剪取0.5～1cm长的丛生芽茎尖浸泡于含有100～2000mg·L-1的秋水仙素和1％二甲基亚砜的溶液中，黑暗条件下振荡12～72h；(4)恢复培养：在无菌条件下，将秋水仙素和二甲基亚砜处理后的丛生芽茎尖用无菌水洗干净，接种于不添加任何激素的MS培养基中培养12～14天后，再接种于丛生芽培养基中培养20～30天，获得多倍体丛生芽；(5)增殖培养：将多倍体丛生芽接种到增殖培养基中进行增殖培养20～25天；(6)多倍体鉴定：取增殖培养后丛生芽的茎尖进行染色体数目观察，在一个根尖上同时观察到5个以上分裂相染色体数目加倍，即可确证该变异株系为多倍体；(7)生根培养：在无菌条件下，将鉴定为多倍体的株系从基部切下，转接到生根培养基中培养15～25天，获得生根苗；(8)炼苗：取出生根苗，转接到装有蛭石、砂子和泥土的盆中，在室内炼苗培养28～40天；(9)移苗：炼苗后，将盆苗移到室外，遮上有70～85％遮阳率的阴棚，培养8～12天后，移去阴棚，进行栽培管理，即可。2.根据权利要求1所述的穿心莲多倍体诱导方法，其特征在于，所述步骤(1)的初代培养基为：MS基本培养基+30～32g·L-1蔗糖+2.0～3.0g·L-1琼脂。3.根据权利要求1所述的穿心莲多倍体诱导方法，其特征在于，所述步骤(2)的丛生芽培养基为：MS基础培养基+0.5～1.0mg·L-16-BA+30～32g·L-1蔗糖+6.0～7.0g·L-1琼脂。4.根据权利要求1所述的穿心莲多倍体诱导方法，其特征在于，所述步骤(5)的增殖培养基为：MS基础培养基+0.5～1.0mg·L-1KT+0.1～0.3mg·L-1NAA+30～32g·L-1蔗糖+6.0～7.0g·L-1琼脂。5.根据权利要求1所述的穿心莲多倍体诱导方法，其特征在于，所述步骤(7)的生根培养基为：1/2MS基础培养基+0.8～1.0mg·L-1IBA+30～32g·L-1蔗糖+6.0～7.0g·L-1琼脂。6.根据权利要求1所述的穿心莲多倍体诱导方法，其特征在于，所述步骤(1)无菌苗的培养条件为：温度26～30℃、光照强度1000～1200Lx、光照周期8～10h光照/14～16h黑暗。7.根据权利要求1所述的穿心莲多倍体诱导方法，其特征在于，所述步骤(2)丛生芽培养条件、步骤(5)增殖培养条件、步骤(7)生根培养条件、步骤(8)炼苗培养条件为：温度25～28℃、光照强度1000～1200Lx、光照周期10～12h光照/12～14h黑暗。8.根据权利要求1所述的穿心莲多倍体诱导方法，其特征在于，所述步骤(8)中蛭石、砂子和泥土的体积比为1:(1～1.5):1。2CN107027622A说明书1/5页一种穿心莲多倍体诱导方法技术领域[0001]本发明涉及植物组培技术领域，具体涉及一种穿心莲多倍体诱导方法。背景技术[0002