一种猪屎豆多倍体高效诱导方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114532222A(43)申请公布日2022.05.27(21)申请号202210203557.X(22)申请日2022.03.03(71)申请人中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所地址571101海南省海口市龙华区学院路4号(72)发明人杨虎彪冷青云李晓霞倪成凤张瑜虞道耿(74)专利代理机构深圳市千纳专利代理有限公司44218专利代理师张新蕊(51)Int.Cl.A01H1/08(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图4页(54)发明名称一种猪屎豆多倍体高效诱导方法(57)摘要本发明提供了一种猪屎豆多倍体高效诱导方法，将暗培养获得的露白猪屎豆种子，浸泡于添加有二甲基亚砜助溶的秋水仙碱溶液中振荡培养，其中，秋水仙碱溶液中秋水仙碱的浓度为0～200mg/L且不为0，培养时间为12～48h；处理结束后，用蒸馏水冲洗3～5遍，播种于盆钵中；从得到的苗中挑选多倍体，即诱导得到多倍体猪屎豆。本发明采用萌发的猪屎豆种子作为多倍体诱导体，优化秋水仙碱浓度和诱导时间，实现了猪屎豆良好变异率和成苗率，多倍体诱导率最高可达到13.33％，提高了成苗质量，操作简单，成本低，稳定性高，便于推广应用，具有良好的应用前景。CN114532222ACN114532222A权利要求书1/1页1.一种猪屎豆多倍体高效诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)种子萌发：将猪屎豆种子清洗消毒后，进行破皮处理，暗培养至种子露白；(2)多倍体诱导：将暗培养获得的露白种子，浸泡于添加有二甲基亚砜助溶的秋水仙碱溶液中振荡培养，其中，秋水仙碱溶液中秋水仙碱的浓度为0～200mg/L且不为0，培养时间为12～48h；处理结束后，用蒸馏水冲洗3～5遍，播种于盆钵中；(3)多倍体鉴定：从得到的苗中挑选多倍体，即诱导得到多倍体猪屎豆。2.根据权利要求1所述的猪屎豆多倍体高效诱导方法，其特征在于，步骤(2)中，秋水仙碱溶液中秋水仙碱的浓度为50～200mg/L，培养时间为12h；或者秋水仙碱溶液中秋水仙碱的浓度为50mg/L，培养时间为12～48h。3.根据权利要求1或2所述的猪屎豆多倍体高效诱导方法，其特征在于，步骤(2)中，秋水仙碱溶液中秋水仙碱的浓度为100～200mg/L，培养时间为12h，或者秋水仙碱溶液中秋水仙碱的浓度为50mg/L，培养时间为24h，优选地，秋水仙碱溶液中秋水仙碱的浓度为100mg/L，培养时间为12h。4.根据权利要求1所述的猪屎豆多倍体高效诱导方法，其特征在于，步骤(2)中，秋水仙碱溶液中秋水仙碱的浓度为50～100mg/L，培养时间为12～24h，或者秋水仙碱溶液中秋水仙碱的浓度为100～200mg/L，培养时间为24h，或者秋水仙碱溶液中秋水仙碱的浓度为200mg/L，培养时间为24～48h，或者秋水仙碱溶液中秋水仙碱的浓度为50～200mg/L，培养时间为24h，优选地，秋水仙碱溶液中秋水仙碱的浓度为100mg/L，培养时间为24h。5.根据权利要求1所述的猪屎豆多倍体高效诱导方法，其特征在于，步骤(1)具体为：将种子猪屎豆先用洗涤剂清洗，新洁尔灭浸泡消毒处理，高温灭菌无菌水冲洗干净，用小刀切破种皮处理，然后，将其按照一定的间隔平铺在铺满纸巾并用无菌水充分湿润的培养盒里，25℃恒温人工气候箱中进行黑暗培养箱暗培养24h，并直至种子露白。6.根据权利要求1所述的猪屎豆多倍体高效诱导方法，其特征在于，猪屎豆种子选择于每年的3月在田间收集宿存于枝条上的猪屎豆种子，荫干后挑选大小一致、籽粒饱满的种子。7.根据权利要求1所述的猪屎豆多倍体高效诱导方法，其特征在于，步骤(3)多倍体鉴定时，根据植株外部形态变化确定为变异苗，取变异株苗生长出的幼嫩叶片进行多倍体鉴定。8.秋水仙碱溶液在高效诱导猪屎豆多倍体和/或混倍体中的应用。9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，按照权利要求1‑7中任意一项所述的方法进行。2CN114532222A说明书1/6页一种猪屎豆多倍体高效诱导方法技术领域[0001]本发明属于植物多倍体育苗技术领域，具体涉及一种猪屎豆多倍体高效诱导方法。背景技术[0002]猪屎豆(Crotalariapallida)为豆科蝶形花亚科猪屎豆属植物，为一年生灌木状草本。广泛分布于非洲、美洲、大洋洲、亚洲热带及亚热带地区。猪屎豆属植物在我国南方地区具有广泛的适应性，秦岭以南的19个省区都有分布。猪屎豆具有药用价值和可供绿肥使用之外，具有生长快、产量高以及粗蛋白含量高等饲用功能特性。总之，猪屎豆是一种开发利用潜力巨大的农业资源植物。[0003]猪屎豆为典型的蝶形花植物，二体雄蕊，且为自交亲和种，不存在无融合生殖现象，主要是通过主动自交产生种子进行繁殖。目前，猪屎豆新品种选育主要以